Survivin、p53和PCNA在腦膜瘤中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 腫瘤的發(fā)生被認(rèn)為是受多基因協(xié)調(diào)控制的細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡過程失衡的結(jié)果。細(xì)胞凋亡受到凋亡促進(jìn)基因(如bax)和凋亡抑制基因(如bcl-2)作用的控制。Survivin基因是一個(gè)凋亡蛋白抑制家族的新成員，通過抑制效應(yīng)caspase分子來(lái)抑制細(xì)胞凋亡途徑。Survivin蛋白在人類大多數(shù)惡性腫瘤如淋巴細(xì)胞瘤、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌和前列腺癌中都有明顯的高表達(dá)。并且抗survivin主動(dòng)免疫反應(yīng)可能發(fā)生的證據(jù)也逐漸增

2、多。p53是明確的抑癌基因，PCNA(增殖細(xì)胞核抗原)是腫瘤細(xì)胞增殖活動(dòng)可靠的標(biāo)志物。腦膜瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的腫瘤之一，surivin、p53和PCNA在腦膜瘤中表達(dá)的相關(guān)性、survivin能否作為腦膜瘤免疫治療的靶基因尚未見報(bào)道。本文通過檢測(cè)survivin、p53和PCNA蛋白在腦膜瘤中表達(dá)情況，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探討三者與腦膜瘤臨床病理類型的相關(guān)性以及三者在腦膜瘤中表達(dá)的相關(guān)性，進(jìn)一步明確它們?cè)谀X膜瘤發(fā)生、增殖、惡變和復(fù)發(fā)中的

3、作用，也試圖提供survivin可以作為腦膜瘤一種新的較好的診斷標(biāo)志物和理想的有希望的免疫治療靶向基因的理論依據(jù)。 方法： 選取河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科2000年1月至2006年5月手術(shù)切除的97例腦膜瘤標(biāo)本及存檔蠟塊。其中男性45例，女性52例；年齡15～76歲，平均50.7±10.6歲，病程3～26個(gè)月。97例腦膜瘤標(biāo)本中原發(fā)腦膜瘤86例，復(fù)發(fā)腦膜瘤11例，其中位于大腦鐮旁21例，大腦凸面22例，蝶骨嵴12例，蝶

4、鞍旁3例，小腦幕3例，前顱窩13例，后顱窩15例，其它部位8例。病歷資料、手術(shù)前后放射影像學(xué)資料、病理資料均完整，術(shù)前均未經(jīng)過化療、放療和免疫治療。18例同期因急性顱腦損傷顳肌下減壓術(shù)切除的正常腦膜作為對(duì)照組。所有標(biāo)本均經(jīng)過10％甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋后存檔備用。每例標(biāo)本以4μm厚度連續(xù)切片，并作HE染色確定病理組織類型。采用鏈霉菌抗生物素-過氧化酶連接(SP)免疫組織化學(xué)方法對(duì)97例腦膜瘤組織和18例正常腦膜組織中survivi

5、n、p53和PCNA單克隆抗體的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。陽(yáng)性病理組織切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野(400x)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算1000個(gè)腫瘤細(xì)胞中survivin、p53或PCNA蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率。免疫反應(yīng)按照下述標(biāo)準(zhǔn)判定：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)O為陰性(-)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<30％為(+)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)30～50％為(++)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥50％為(+++)。選擇腫瘤細(xì)胞標(biāo)記密集的區(qū)域評(píng)估PCNA LI，PCNA-LI為陽(yáng)性

6、染色細(xì)胞數(shù)在1000個(gè)腫瘤細(xì)胞中所占的比例(每張切片選取10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞)。本研究所有統(tǒng)計(jì)分析用SPSS11.0 for Windows軟件包進(jìn)行。應(yīng)用X<'2>檢驗(yàn)、Mann-Whitney U法、方差分析-q檢驗(yàn)、Spearman等級(jí)相關(guān)分析對(duì)本報(bào)告結(jié)果進(jìn)行比較。所有檢驗(yàn)結(jié)果p<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 根據(jù)WHO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，腦膜瘤Ⅰ級(jí)60例，Ⅱ級(jí)21例，Ⅲ級(jí)16例。在所有病例中，

7、survivin免疫反應(yīng)位于細(xì)胞漿，p53和PCNA免疫反應(yīng)在細(xì)胞核。在陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞中Survivin、p53和PCNA免疫組化反應(yīng)呈現(xiàn)黃色、淡黃色、或棕黃色顆粒。 Survivin、p53和PCNA蛋白在腦膜瘤中的表達(dá)和患者年齡、性別、腫瘤大小以及生長(zhǎng)部位無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05)。 初發(fā)組和復(fù)發(fā)組腦膜瘤陽(yáng)性表達(dá)率分別為：survivin61.6％和100％；p53 20.9％和81.8％；PCNA51.2％和90.9％。復(fù)

8、發(fā)組SUrvivin、p53和PCNA蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于初發(fā)組(P<0.05)。 Survivin在正常腦膜和腦膜瘤組織中表達(dá)陽(yáng)性率為0％和65.9％，差異具有顯著性(P<0.001)。Survivin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在腦膜瘤Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)分別為51.7％(31/60)、85.7％(18/21)、93.8％(15/16)，隨著病理級(jí)別升高而升高，并和腦膜瘤病理級(jí)別顯著相關(guān)性(P<0.01)。Survivin蛋白表達(dá)陽(yáng)性率腦

9、膜瘤Ⅱ級(jí)明顯高于Ⅰ級(jí)(P<0.001)；腦膜瘤Ⅲ級(jí)明顯高于Ⅰ級(jí)(P<0.001)。腦膜瘤Ⅱ級(jí)同腦膜瘤Ⅲ級(jí)之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 p53在正常腦膜和腦膜瘤組織中表達(dá)陽(yáng)性率為0％和27.8％(27/97)，差異均具有顯著性(P<0.05)。p53蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在腦膜瘤Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)分別為13.3％(8/60)、 +38.1％(8/21)、68.8％(11/16)，隨著病理級(jí)別升高而升高，并和病理級(jí)別顯著相關(guān)(P<0.0

10、1)。p53蛋白在腦膜瘤Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)不同病理分化之間的差異均具有顯著性(P<0.001)。 PCNA蛋白在正常腦膜和腦膜瘤組織中表達(dá)陽(yáng)性率為0％和55.7％(54/97)，差異具有顯著性(P<0.001)。PCNA蛋白表達(dá)陽(yáng)性率在腦膜瘤Ⅰ級(jí)為41.7％(25/60)，Ⅱ級(jí)為71.4％(15/21)，Ⅲ級(jí)為87/5％(14/16)，隨著病理級(jí)別升高而上升，并和病理級(jí)別顯著相關(guān)(P<0.01)。非參數(shù)秩和檢驗(yàn)顯示腦膜瘤Ⅱ級(jí)同Ⅰ級(jí)

11、之間的差異具有顯著性(P<0.01)；腦膜瘤Ⅲ級(jí)同Ⅰ級(jí)之間的差異有極顯著性(P<0.001)。腦膜瘤Ⅱ級(jí)同Ⅲ級(jí)之間的差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)。PCNA在腦膜瘤Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)中的標(biāo)記指數(shù)為15.48±21.13，38.14±27.78．57.69±35.07，隨著腦膜瘤組織級(jí)別的升高而升高，在腦膜瘤各級(jí)之間差異具有顯著性意義(P<0.001)。腦膜瘤中survivin與p53蛋白表達(dá)，Survivin與PCNA蛋白表達(dá)，p53和

12、PCNA蛋白表達(dá)均呈正相關(guān)關(guān)系(r<,s>=0.451，0.640，0.625，P<0.01)。 結(jié)論： ①Survivin，PCNA和p53蛋白在腦膜瘤中廣泛表達(dá)并和腦膜瘤的組織級(jí)別密切相關(guān)。②Survivin、p53和PCNA在腦膜瘤中的表達(dá)存在正相關(guān)性，影響和促進(jìn)腦膜瘤發(fā)生、增殖、惡變和復(fù)發(fā)。③Survivin過度表達(dá)是腦膜瘤發(fā)生的早期或初始事件，可以作為判斷腦膜瘤發(fā)生或復(fù)發(fā)的早期診斷指標(biāo)。④Survivin是腦膜