光動力學療法治療大鼠C6膠質瘤的實驗研究.pdf

1、目的:建立大鼠腦內及裸鼠皮下C6膠質瘤模型，分析5-氨基乙酰丙酸(5-Aminolevulinicacid，ALA)、血卟林衍生物(hematoporphyrinderivative，HPD)及ALA+HPD光動力學療法(Photodynamictherapy，PDT)治療C6膠質瘤的療效、安全性及PDT的作用機制，為臨床PDT治療膠質瘤提供實驗依據(jù)。 方法:本課題第一部分研究立體定向建立大鼠腦深部C6膠質瘤模型，觀察立體定向顱

2、內右側尾狀核接種C6膠質瘤細胞后10d、15d、20d及生存期觀察組的MRI、大體及HE染色組織病理、免疫組化檢查(GFAP)、透射電鏡(TEM)和腦組織含水量的變化，來了解大鼠腦深部C6膠質瘤的生長浸潤特性；課題第二部分分析ALA、HPD及ALA+HPDPDT治療大鼠腦深部C6膠質瘤的療效、安全性及PDT的作用機制。在大鼠腦內移植入C6膠質瘤15d時，通過開骨窗后非荷瘤鼠PDT(HPD)、荷瘤鼠的單純激光照射及三組光敏劑PDT治療腦深

3、部C6實體膠質瘤，觀察非荷瘤鼠PDT對照組、荷瘤鼠單純激光照射組及三組光敏劑PDT后生存期的改變，觀察荷瘤鼠單純激光照射及三組光敏劑PDT后1、3、5、9d及生存期觀察組的MRI、腦組織含水量、大體及HE染色組織病理、透射電鏡的變化，并與非荷瘤鼠PDT的變化比較，探索研究PDT治療膠質瘤的療效、安全性及PDT地作用機制；課題第三部分建立C6膠質瘤的裸鼠皮下移植瘤，測量三組光敏劑PDT治療及單純光照射裸鼠皮下膠質瘤后3d、7d、10d的腫

4、瘤體積并計算抑瘤率，然后處死裸鼠行HE染色組織病理觀察，結合荷瘤大鼠的三組光敏劑PDT治療的結果綜合探討PDT的療效、安全性及其作用機制。 結果:1.立體定向顱內種植C6膠質瘤細胞荷瘤鼠的癥狀出現(xiàn)于10d后，15-20d內癥狀明顯加重。MRI顯示10d時腫瘤平均直徑約1-2mm，15d時3-5mm，20d時4-8mm。荷瘤鼠的生存期觀察組10只大鼠有3只未死亡，MRI及大體病理顯示腫瘤自發(fā)性縮小，且其中1只腫瘤消失。大體及病理、

5、TEM結果顯示C6膠質瘤血管豐富，邊界模糊，腫瘤向正常腦組織浸潤性生長。腦組織含水量隨腫瘤的生長明顯加重。顱內接種C6膠質瘤未發(fā)現(xiàn)顱外轉移灶。 2.C6膠質瘤細胞顱內種植大鼠荷瘤后15d經ALA、HPD及ALA+HPDPDT治療后生存期觀察，其平均生存期明顯延長(80d以上)，荷瘤鼠的單純光照射組平均生存期為38.5d，兩者間存在顯著差異(P＜0.01)，三組光敏劑PDT之間的療效無明顯差異，且ALA+HPDPDT的1-3d內腦

6、組織含水量較ALA及HPD組重。 3.MRI掃描顯示荷瘤鼠三組光敏劑PDT后腫瘤體積明顯縮小，生存期觀察大鼠MRI掃描均未發(fā)現(xiàn)腫瘤征象，而荷瘤鼠單純光照射后MRI掃描顯示腫瘤體積逐漸增大，與荷瘤鼠三組光敏劑PDT相比較存在顯著差異(P＜0.01)。 4.光鏡結果顯示非荷瘤鼠HPDPDT1-3d內表層腦組織也可見出血死亡，但程度較輕，3d后逐漸恢復正常；荷瘤鼠單純光照射組光鏡結果僅1d時可見瘤內充血，但未見瘤周出血及腫瘤細

7、胞死亡；荷瘤鼠的各組PDT后，光鏡及電鏡結果1-3d內腫瘤及瘤周腦組織出現(xiàn)明顯的血管破裂出血，腫瘤及瘤周區(qū)組織細胞死亡明顯，5d后腫瘤細胞周圍膠質纖維增生包裹腫瘤。 5.荷瘤鼠的PDT后及非荷瘤鼠PDT對照組大鼠的腦組織含水量的測定結果顯示3d內腦組織含水量明顯增高，3d后逐漸降低，而荷瘤鼠的單純光照射對照組的腦組織含水量呈持續(xù)上升直至死亡。 6.C6膠質瘤裸鼠皮下移植瘤各治療組的對側對照腫瘤體積逐漸增大；裸鼠移植瘤單純

8、光照射后出現(xiàn)小片狀滲血，較PDT組明顯輕，未見腫瘤細胞死亡，而且腫瘤體積逐漸增大；裸鼠移植瘤三組光敏劑PDT后，腫瘤生長得到抑制，并出現(xiàn)瘤區(qū)皮下出血。 7.C6膠質瘤裸鼠皮下移植瘤各治療組的對側對照10d時光鏡下可見腫瘤細胞向間質內浸潤生長，未見腫瘤細胞死亡；裸鼠皮下移植瘤單純光照射少見陳舊性出血，未見腫瘤細胞死亡；三組光敏劑PDT可見腫瘤細胞死亡及間質內陳舊性出血。 結論:1.立體定向建立顱內C6膠質瘤的成功率高，接種

9、后腫瘤呈浸潤性生長，能模擬人腦膠質瘤的特性，但大鼠的C6膠質瘤存在部分自發(fā)消退，故在該模型評價療效時應慎重。 2.ALA、HPD及ALA+HPDPDT后均可明顯延長荷瘤大鼠的生存期，且在大鼠腦內移植瘤和裸鼠皮下移植瘤三組光敏劑PDT之間的療效無明顯差異。 3.ALA、HPD及ALA+HPDPDT治療能有效殺滅腦內C6膠質瘤細胞，而裸鼠皮下移植瘤模型中這三組光敏劑PDT主要表現(xiàn)為抑瘤效應。 4.PDT后腦內局部的免