抑制性消減雜交和cDNA微陣列技術(shù)研究星星草耐鹽機理.pdf

1、星星草是一種有較強耐鹽堿能力的植物，是松嫩平原鹽堿地的優(yōu)勢植物之一。為研究星星草的耐鹽堿機理，以400mMNaHCO3處理后6h、12h、24h和48h的星星草葉片為Tester，以非脅迫葉片為Driver，分別構(gòu)建了4個抑制性消減文庫，對文庫克隆測序并進行了表達序列標簽(EST)分析。用獲得的基因序列構(gòu)建了星星草cDNA微陣列，用微陣列研究了NaHCO3脅迫下不同時間星星草基因的表達。 PCR檢測和序列測定顯示，4個抑制性消減

2、文庫的插入片段的平均長度為302bp。從文庫中隨機挑選1964個克隆進行測序，去除載體序列、polyA/T、低質(zhì)量重復序列和短于100bp的序列以及合理序列編輯后，共獲得了1775條高質(zhì)量的cDNA序列，它們的GenBank登錄號為EB104056-EB105830。 將各個消減文庫ESTs進行功能注釋，并根據(jù)MIPS分類標準分別進行分類。這些基因主要分為代謝、光合作用、防御、轉(zhuǎn)運、信號傳導、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白合成和再生、新基因等類

3、群。結(jié)果顯示NaHCO3脅迫下的不同時間，基因表達發(fā)生了明顯的變化。例如，細胞防御類基因序列在NaHCO3脅迫48h和6h文庫中表達量最為豐富，分別占文庫總克隆數(shù)的10％和8％，而在NaHCO3脅迫24h的文庫中，該類基因只占文庫的2％；轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)類基因在6h和48h文庫所占4％，而在12h和24h文庫中僅分別為2％和1％；蛋白降解和循環(huán)類基因和細胞信號傳導基因在48h文庫中占8％，而它們在24h文庫中所占比只有2％，說明NaHCO3脅迫

4、下星星草的基因的表達處在不斷變化中。 用cDNA微陣列技術(shù)研究NaHCO3脅迫下6h、12h、24h和48h基因的表達，共篩選到142個差異表達明顯的基因。同時發(fā)現(xiàn)，各消減文庫在其所對應的脅迫時間有97％的基因在上調(diào)表達，消減文庫構(gòu)建成功，也表明對文庫進行EST分析完全可以說明哪些基因在脅迫中上調(diào)表達。芯片分析顯示NaHCO3脅迫下差異基因表達共有6種模式，其中模式為在6h和24h表達量高于12h，在48h表達水平又低于24h的