利用抑制消減雜交技術(shù)篩選乳腺癌相關(guān)基因.pdf_第1頁
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1、乳腺癌是最為常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)生發(fā)展的過程有多種基因的參與,erbB2基因就是其中一個。erbB2在多種腫瘤中高表達,在乳腺癌中則能在30%的樣本中檢測到其表達過高,而且預后性差。但是erbB2在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的生物學功能仍然不是十分清楚。為了發(fā)現(xiàn)新的與erbB2陽性乳腺癌相關(guān)的基因,我們運用抑制消減雜交技術(shù)(正向和反向消減)構(gòu)建了小鼠乳腺腫瘤組織和正常乳腺組織之間的cDNA消減文庫。隨后,利用T/A克隆技術(shù)將所得的兩個消減文庫

2、cDNA與pMD18-T載體重組,通過轉(zhuǎn)化導入E. coliDH5α大腸桿菌。在所得到的克隆中隨機挑選了800個陽性克隆,并且用菌落PCR進行了驗證。用反向斑點雜交技術(shù)再次驗證后,獲得80個陽性克隆并進行了DNA測序,測序結(jié)果進一步在美國國立生物技術(shù)信息中心的GenBank和EST數(shù)據(jù)庫里進行同源性比對。通過這一系列的分析,最后得到了40個在小鼠乳腺腫瘤中異常表達的基因或EST,這些基因或EST有的被報道過在乳腺癌中異常表達,有的則沒有

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