不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)夫婦經(jīng)微陣列比較基因組雜交技術(shù)行胚胎植入前遺傳學(xué)篩查的回顧性分析.pdf

1、研究背景:
　　流產(chǎn)為妊娠未滿28周、胎兒未足1000g而終止者，流產(chǎn)分為自然流產(chǎn)和人工流產(chǎn)，其中自然流產(chǎn)發(fā)生率為10％～15％。與同一性伴侶發(fā)生的3次或3次以上自然流產(chǎn)者稱為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的已知原因可分為染色體異常、子宮結(jié)構(gòu)異常、內(nèi)分泌異常、免疫功能異常、感染因素、遺傳性凝血異常及環(huán)境因素。約50％復(fù)發(fā)性流產(chǎn)夫婦檢查以上已知相關(guān)原因均未見異常，稱為不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（unexplained recurrent misca

2、rriage，uRM）。uRM嚴(yán)重影響患者夫婦的生理及心理健康，是生殖醫(yī)學(xué)的難題。其潛在的原因復(fù)雜多變，目前認(rèn)為母胎界面異常、免疫因素等都是其可能的原因。另外，胎兒染色體異常為uRM的重要因素之一，尤其是對(duì)于前幾次流產(chǎn)未行絨毛檢測(cè)患者或者高育齡且符合助孕指征的患者來(lái)說(shuō)，胚胎植入前遺傳學(xué)篩查(preimplantation geneticscreening，PGS)是必要的，可以從胚胎學(xué)角度減少?gòu)?fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生。
　　PGS是行體外

3、受精(in vitro fertilization，IVF)助孕夫婦在胚胎移植前，取極體、卵裂球細(xì)胞、囊胚滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞行遺傳學(xué)檢測(cè)，以檢測(cè)胚胎是否有染色體異常，進(jìn)而提高胚胎著床能力及降低與非整倍體相關(guān)的流產(chǎn)及胎兒的出生。PGS主要應(yīng)用于發(fā)生在染色體核型正常夫婦的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、女方高育齡、反復(fù)胚胎植入失敗及嚴(yán)重男性因素引起的不育。常規(guī)PGS技術(shù)為熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)

4、技術(shù)，隨著技術(shù)的發(fā)展，比較基因組雜交(comparative genomic hybridization，CGH)技術(shù)逐漸在PGS中運(yùn)用。
　　微陣列比較基因組雜交(array-based comparative genomic hybridization，a-CGH)技術(shù)為新發(fā)展起來(lái)的一種高效細(xì)胞染色體核型分析技術(shù)，通過(guò)一次分子雜交實(shí)驗(yàn)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞全基因組高分辨率、高通量核型分析，適用于PGS中行3～5個(gè)胚胎細(xì)胞染色體核型分析。由于

5、技術(shù)的限制，F(xiàn)ISH技術(shù)不能檢測(cè)胚胎全基因組24條染色體的情況，而a-CGH技術(shù)不僅能分析出染色體數(shù)目異常，更能分析出缺失、重復(fù)等結(jié)構(gòu)異常，但不能分析出平衡易位及多倍體異常者。
　　研究目的:
　　回顧性分析uRM夫婦經(jīng)a-CGH技術(shù)行PGS助孕后，胚胎染色體異常類型及異常比例。
　　研究方法:
　　統(tǒng)計(jì)就診于山東大學(xué)附屬生殖醫(yī)院的夫婦中診斷為uRM行PGS技術(shù)助孕的2013年01月至2014年10月a-CGH胚

6、胎染色體核型分析結(jié)果，共45對(duì)夫婦47周期169枚胚胎染色體核型分析結(jié)果，運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　研究結(jié)果:
　　1.患者夫婦中女方平均年齡33.62±5.21歲（23-43歲），平均流產(chǎn)次數(shù)為3.89±1.17次（3-7次）。169枚胚胎中96枚為整倍體胚胎，整倍體胚胎比率為56.80％，73枚為非整倍體胚胎，包括染色體數(shù)目異常及結(jié)構(gòu)異常，非整倍體胚胎比率為43.20％。
　　2.單條染色體

7、異常（單體、三體、染色體大片段缺失或增加）的胚胎數(shù)為43枚，其中，單體胚胎17枚，比率為39.53％(17/43)，三體胚胎14枚，比率為32.56％(14/43)，單體與三體胚胎比率為1.31。
　　3.將胚胎染色體異常按照染色體編號(hào)進(jìn)行分類，其中若一枚胚胎中有2條或2條以上染色體出現(xiàn)異常，則每條染色體異常各計(jì)數(shù)一次，按照染色體編號(hào)行柱狀圖后發(fā)現(xiàn)，染色體組中每條染色體均會(huì)發(fā)生異常，其中16、22、8、2、6號(hào)染色體出現(xiàn)異常的比例

8、相對(duì)較高。
　　4.將患者夫婦按照女方年齡分為23-29、30-39、40-43歲組，各年齡組異常胚胎率分別為48.78％、36.75％、71.43％，統(tǒng)計(jì)分析示30-39歲組與40-43歲組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，23-29歲組與30-39歲組之間和23-29歲組與40-43歲組之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　5.將患者夫婦按照女方年齡分組，分為23-37、38-43歲組，各年齡組異常胚胎率分別為38

9、.93％、60.53％，統(tǒng)計(jì)分析示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　6.截止至2015年4月，共移植35周期38枚胚胎，胚胎著床率為73.68％，移植周期臨床妊娠率為71.43％，流產(chǎn)率為32％，繼續(xù)妊娠及活產(chǎn)率為68％。
　　研究結(jié)論:
　　1.形態(tài)學(xué)正常的胚胎可出現(xiàn)染色體異常，因此，形態(tài)學(xué)不能作為胚胎篩選的唯一標(biāo)準(zhǔn)。
　　2.不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)夫婦經(jīng)a-CGH行PGS助孕，篩查整倍體胚胎對(duì)于胚胎著床及繼續(xù)