流式細(xì)胞術(shù)分析尿脫落細(xì)胞DNA對(duì)膀胱腫瘤診斷和預(yù)后估計(jì)的回顧性研究.pdf

1、目的: 更好地了解流式細(xì)胞(FCM)DNA分析對(duì)膀胱腫瘤診斷的敏感性,以及異倍體峰、S期細(xì)胞峰百分比(SPF)、G0/G1期變異系數(shù)(CV)、凋亡峰(APO)與腫瘤診斷、病理分級(jí)和預(yù)后判斷之間的關(guān)系和意義. 材料和方法: 所有病例分為53例膀胱腫瘤組和26例非腫瘤組兩組.留取兩組患者的清晨第二次小便.先將標(biāo)本離心10分鐘,再將沉淀的細(xì)胞用PBS緩沖液清沈和離心兩次,將沉淀細(xì)胞制備成細(xì)胞濃度為10<'6>/ml的懸

2、液.按DNA-PrepKit試劑盒操作說(shuō)明將細(xì)胞的DNA用PI熒光染色.調(diào)節(jié)流式細(xì)胞儀光路系統(tǒng),使CV≤2﹪,以人淋巴細(xì)胞為參考標(biāo)準(zhǔn),使CV<5﹪,通過(guò)FSC和SSC"設(shè)門(mén)"去除細(xì)胞碎片,通過(guò)FL2-A和FL2-W"設(shè)門(mén)"去除細(xì)胞團(tuán)塊.將染色細(xì)胞上機(jī)檢測(cè),再通過(guò)Multicycle軟件分析數(shù)據(jù),結(jié)果用DNA直方圖表示.膀胱腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)采用Collste和Klein提出的標(biāo)準(zhǔn). 將79例進(jìn)行尿流式細(xì)胞DNA分析的病例分為腫瘤組和對(duì)

3、照組,腫瘤組53例,對(duì)照組26例.其中將腫瘤組病例又分為:乳頭狀瘤(6例)、G1級(jí)膀胱癌(21例)、G2級(jí)膀胱癌(18例)、G3級(jí)膀胱癌(8例)四組.將FCM檢測(cè)的各參數(shù),如:FCM陽(yáng)性率、異倍體比率、SPF、CV和ADO等在腫瘤組和對(duì)照組,以及各級(jí)腫瘤分組間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析.所有數(shù)據(jù)均用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理. 結(jié)果: 腫瘤組FCM陽(yáng)性38例,對(duì)照組FCM陽(yáng)性7例,腫瘤組和對(duì)照組的FCM陽(yáng)性率分別是71.7﹪和2

4、6.9﹪,對(duì)兩組FCM陽(yáng)性率進(jìn)行x<'2>檢驗(yàn),P<0.005,腫瘤組FCM陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組.腫瘤組出現(xiàn)異倍體細(xì)胞峰的16例,包括:G3級(jí)6例,G2級(jí)8例,G1級(jí)2例,乳頭狀瘤0例.對(duì)各級(jí)膀胱腫瘤出現(xiàn)異倍體病例數(shù)進(jìn)行Fisher檢驗(yàn),提示從乳頭狀瘤到G3呈現(xiàn)異倍體出現(xiàn)逐漸增多的趨勢(shì).對(duì)照組無(wú)異倍體出現(xiàn). 將腫瘤組分為異倍體組和無(wú)異倍體組.異倍體組共16例,復(fù)發(fā)14例;無(wú)異倍體組共37例,復(fù)發(fā)17例.對(duì)兩組復(fù)發(fā)率進(jìn)行X<'2>

5、檢驗(yàn),P<0.005,異倍體組復(fù)發(fā)率顯著高于無(wú)異倍體組. 腫瘤組SPF>15﹪共31例,包括:G3級(jí)7例,G2級(jí)10例,G1級(jí)12例,乳頭狀瘤2例.對(duì)各級(jí)膀胱腫瘤SPF>15﹪的比率進(jìn)行兩組間的Fisher檢驗(yàn),各組問(wèn)均P>0.05,說(shuō)明各級(jí)膀胱腫瘤出現(xiàn)SPF>15﹪的比率統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)明顯差別. 對(duì)照組中有5例SPF大于15﹪.對(duì)腫瘤組和對(duì)照組SPF>15﹪的比率進(jìn)行X<'2>檢驗(yàn), P<0.005,說(shuō)明腫瘤組SPF>15

6、﹪比率顯著高于對(duì)照組. 各級(jí)膀胱腫瘤的SPF值:G3級(jí)SPF=32.24±8.48,G2級(jí)SPF=21.49±6.93,G1級(jí)SPF=16.70±4.55,乳頭狀瘤SPF=8.7±5.75.對(duì)各級(jí)膀胱腫瘤的SPF值進(jìn)行方差檢驗(yàn),除了G2、G1組外,其余各組間的P均<0.05,有顯著性差異,說(shuō)明隨著腫瘤惡性程度的增加,SPF值也逐漸增加. 腫瘤組中31例復(fù)發(fā)病例SPF=24.66±7.45,22例未復(fù)發(fā)病例SPF=12.8

7、7±5.67.對(duì)兩組SPF值進(jìn)行t檢驗(yàn),說(shuō)明腫瘤組復(fù)發(fā)病例SPF值顯著高于未復(fù)發(fā)病例. 腫瘤組G0/G1期CV大于9﹪的病例共26例,包括:G3級(jí)5例,G2級(jí)11例,G1級(jí)8例,乳頭狀瘤2例.對(duì)各級(jí)膀胱腫瘤G0/G1期CV>9﹪的比率進(jìn)行兩組間的Fisher檢驗(yàn),各組均P>0.05,說(shuō)明各級(jí)膀胱腫瘤出現(xiàn)G0/G1期CV>9﹪的比率統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)明顯差別. 對(duì)照組G0/G1期CV大于9﹪的有4例.將腫瘤組與對(duì)照組G0/G1期C

8、V>9﹪的比率進(jìn)行X<'2>檢驗(yàn), P<0.005,腫瘤組G0/G1期CV>9﹪的比率要顯著高于對(duì)照組. 腫瘤組53例病例中有17例出現(xiàn)APO,對(duì)照組26例病例中有3例出現(xiàn)APO,兩組出現(xiàn)APO的比率進(jìn)行X<'2>檢驗(yàn),腫瘤組出現(xiàn)APO比率要顯著高于對(duì)照組.對(duì)照組7例FCM陽(yáng)性患者中,5例合并有尿路感染;5例可疑陽(yáng)性患者中,2例合并有尿路感染.在對(duì)照組的FCM陽(yáng)性和可疑陽(yáng)性病例中,有尿路感染情況的比例比較大,為58.3﹪.