糖尿病大鼠膀胱腎上腺素能β-,3-受體改變的實驗研究.pdf

1、目的：糖尿病膀胱病變(DCP)是糖尿病的常見并發(fā)癥之一，它嚴重影響著人類的健康狀況和生存質(zhì)量，因此越來越受到人們的重視。DCP的病因尚不完全清楚，且影響因素很多。但不論哪種因素要影響膀胱的功能與形態(tài)都必須通過膀胱逼尿肌細胞來實現(xiàn)，所以近年來對于DCP肌原性因素的研究成為熱點。一方面，動物實驗中發(fā)現(xiàn)糖尿病膀胱逼尿肌舒張功能早期就受到損傷，另一方面，腎上腺素能β3受體(β3-AR)是調(diào)節(jié)人和大鼠逼尿肌舒張功能的最主要因素。據(jù)此，本研究應(yīng)用鏈

2、脲佐菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射誘導(dǎo)形成Ⅰ型糖尿病大鼠動物模型，通過蛋白印記方法(Western blotting 法)研究糖尿病大鼠膀胱中腎上腺素能β3受體(β3-adrenergic receptor，β3-AR)的表達情況，分析糖尿病膀胱病變(diabetic cystopathy，DCP)與膀胱中β3-AR表達的相關(guān)性，探討β3-AR在DCP發(fā)生發(fā)展中的作用，為應(yīng)用高選擇性β3-AR激動劑治療DCP奠定理

3、論基礎(chǔ)。 方法：將80只體重在180g-200g之間的健康清潔級Wistar雌性大鼠按隨機化原則分為糖尿病模型組(n=40)及正常對照組(n=40)。糖尿病模型組隨機分成5組，分別在發(fā)病第2周、4周、6周、8周及10周取材實驗，各時間點均設(shè)立正常對照組，每組8只大鼠，即2周糖尿病模型組及對照組，4周糖尿病模型組及對照組，6周糖尿病模型組及對照組，8周糖尿病模型組及對照組，10周糖尿病模型組及對照組(n=8)。應(yīng)用鏈脲佐菌素(st

4、reptozotocin，STZ)腹腔注射，將40只健康清潔級Wistar大鼠誘導(dǎo)形成Ⅰ型糖尿病大鼠模型，劑量為60mg/kg，正常對照組腹腔注射等體積的枸櫞酸緩沖液。注射STZ72小時后測尾靜脈血葡萄糖濃度(blood glucose，BG)。糖尿病模型組大NBG>16.7mmol/L，并且持續(xù)一周為模型成功。兩組均普通飼料飼喂，自由進食進水。將造模成功的大鼠分別于發(fā)病第2周、4N、6N、8N及10周時進行實驗，再次檢測兩組大鼠尾靜脈

5、血葡萄糖濃度，糖尿病模型組大鼠BG<16.7mmol/L仍被排除。蘇木素-伊紅(Haematoxy-lin-Iraq red，HE)染色后，光鏡下觀察糖尿病大鼠膀胱逼尿肌的形態(tài)學變化。采用蛋白印記方法(Western blotting法)檢測各組大鼠膀胱逼尿肌細胞β3-AR蛋白的表達情況。采用SPSS13.0系統(tǒng)軟件對數(shù)據(jù)處理：結(jié)果采用均數(shù)±標準差(Mean±Std)表示，進行t和t1檢驗等統(tǒng)計學處理。 結(jié)果： 1.動物

6、一般情況：肉眼觀察：糖尿病模型組大鼠隨病程增加逐漸出現(xiàn)糖尿病癥狀，如皮毛失去光澤，飲水量、食量、尿量增加，排泄稀便等。各糖尿病模型組大鼠血糖明顯高于相應(yīng)的正常對照組，依次為[2w：(34.4±0.4mmol/L)vs(4.4±0.4rnmol/L)，4w：(32.64±3.7mmol/L)vs(5.24±0.5mmol/L)，6w：(35.1±3.7mmol/L)vs(5.5±0.2mmol/L)，8w：(30.9q±3.3mmol/L

7、)vs(4.8±0.3mmol/L)，10w：(34.24±2.9mmol/L)vs(4.54±0.6mmol/L)(P<0.05)]：正常對照組生長良好，體重逐漸增加，各組糖尿病模型組大鼠體重較正常對照組增長緩慢，依次為[2w：(188.05±10.03g)vs(212.804±10.26g)，4w：(190.224±8.31g)vs(258.22±10.31g)，6w：(188.06±13.52g)vs(311.80±8.92g)，

8、8w：(174.83±12.18g)vs(342.80±16.91g)，10w：(175.23±11.23g)vs(345.16±15.22g)(P<0.05)]；膀胱濕重測定：糖尿病模型組大鼠膀胱濕重明顯重于正常對照組，依次為[2w：(183.99±14.89mg)vs(150.34±5.30mg)，4w：(200.17±14.40mg)vs(150.48±9.86mg)，6w：(207.27±17.92mg)vs(152.90±9.

9、83mg)，8w：(210.58±2095mg)vs(148.04±9.72mg)，10w：(223.94±20.45mg)vs(145.28±11.60mg)(P<0.05)]。各糖尿病模型組血糖、體重、膀胱濕重相比較差異無顯著性意義。 2.大鼠膀胱逼尿肌病理學改變：HE染色后光鏡下觀察正常組和各組糖尿病模型組大鼠逼尿肌的結(jié)構(gòu)表現(xiàn)。正常對照組：移形上皮細胞排列整齊，固有膜完整，逼尿肌細胞大小形態(tài)均一，肌纖維排列有序，肌束之間結(jié)

10、構(gòu)緊密，間隙被結(jié)締組織所充滿。各時間段的糖尿病組膀胱逼尿肌均出現(xiàn)損害，并隨病程延長而加重。具體表現(xiàn)為：逼尿肌細胞代償性肥大，形態(tài)多樣，變性，間質(zhì)和膠原成分增多，之后肌束排列紊亂松散，肌束橫斷面飽滿，體積增加，肌束之間間隙明顯增寬，膠原及纖維組織明顯增生并出現(xiàn)大量空泡；最后逼尿肌細胞萎縮、減少甚至消失，僅見大量的膠原及彈性纖維成分。 3.大鼠膀胱逼尿肌β3-AR蛋白表達情況：蛋白印記方法結(jié)果顯示：糖尿病模型組大鼠膀胱逼尿肌細胞β3

11、-AR蛋白表達水平明顯高于正常對照組大鼠膀胱逼尿肌細胞內(nèi)β3-AR蛋白表達水平，依次為[2w：(0.73+0.09)vs(0.35±0.04)，4w：(0.81±0.13)vs(0.32±O.06)，6w：(0.72±0.05)vs(0.33±0.04)，8w：(0.55±0.07)vs(0.33±0.06)，10w：(0.52±0.07)vs(0.33±0.05)(p<0.05)]，其中以2周，4周及6周時增加更明顯。 結(jié)論：