鴨MHCⅠ和β2m基因的表達與純化及其蛋白二級結構分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中國農業(yè)大學碩士學位論文鴨MHCⅠ和β2m基因的表達與純化及其蛋白二級結構分析姓名：阮小飛申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：夏春20060601AbstractInordertoillustratethesecondarystructuresofAnplMHCIandAnplp2mproteins，threeAnpl—MHCIandneeAnplf=12mallelegeneswereexpressed，andtheirstr

2、ucturesweremensuratedTheextracellulardomainofthreeAnplMHCI(AnpIUAA01，AnplUCA01，AnplUDAOI)andthematurepeptideofAnpl02mwereamplifiedbyPCRmethodrespectivelyAtthesametime，theBSPsequencewaslinkedtotheCterminusofthefragmentofA

3、nplMHClbyPCR，Asresults，861bp，864bp，and864bpPCRfragmentsofAnplMHCIBSEand297bpPCRfragmentofAnplf32mwereobtained，andtheirsequencesareidenticalwiththeirtemplatecDNAandtheBSEThen，thefragmentsofAnptMHCIBSPandAnplB2mwereexpress

4、edusingprokaryoticespressionsystempMALp2X／EcoilTBlTheexpressedfusionproteinswerenamedMBP—MHC1BSPUAA01MBPMHCIBSPUCA01MBPMHCIBSPUDA0landMBP132mSubsequentlythesefusionproteinswerepurifiedbyAmyloseaffinityresincolumn，andanal

5、yzedbyWesternblotTheresultsofSDS—PAGE，purificationandWestern—blotindicatedthatthemolecularweightofMBP—MHCIBSPfusionproteinsare734kDaandthemolecularweightofMBP132mfusionproteinis532kDaThenthefusionproteinswerecleavedbyFac

6、torXaproteaseTheresultsrevealedthatalltheywerecleavedintoMBPproteinandAnplMHCIBSPproteinandAnpl一82mproteinAtlastthesecondarystructurecontentsoffusionproteinswereestimatedbycimulardichroism(CD)spectrumThethree—dimentional

7、(3D)structuresoftheAnplMHCIandAnpLf32mproteinswereestimatedbyhomologymodelingAnalysisofthepurifiedfusionproteinsbyCDspectrumrevealedthattheAnplMHCIproteindisplayedty’picalahelixstructure，andthecontentsofⅡhelix，13sheet，tu

8、rnandrandomcoilinthreeAnplMHCIproteinswere59～60aa、57～71aa、61～70aaand96～104aarespectivelyThehomologymodelingof3DstructureofthreeAnplMHCIallelesaresimilarashuman’sTheresultofthefarUVCDspectrumshowedthattheAnplfi2mproteindi

9、splayedtypicalpsheetstructure，thecontentsoftthelix，psheetturnandrandomcoilwas0aa50aa23a％and26aa，respectivelyThe3DstructureofAnpl132mproteinestimatedbyhomologymodelingwassimilarashuman’sconsistingofseven13sheetSwithoutthe

10、helixInsummarythreeAnpIMHCIproteinsandoneAnplp2mproteinswereexpressedandpurified，andtheirsecondarystructureweredetectedbyCDspectrumTheproteinsmightbeapowerfultooltofurtherstudythetetramerictechnologytoidentifyTcellepitop

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