分娩發(fā)動(dòng)前后孕婦蛻膜及外周血中NK、NKT細(xì)胞生物學(xué)特性的研究.pdf

1、研究背景：正常的妊娠，是母體免疫系統(tǒng)對(duì)帶有父源抗原的胎兒產(chǎn)生的一種免疫耐受現(xiàn)象，這種耐受是由多種因素之間相互制約、相互調(diào)節(jié)產(chǎn)生的。近年生殖免疫學(xué)者對(duì)自然殺傷細(xì)胞(NK cells)和自然殺傷T細(xì)胞(NKT cells)在其中的作用給予更多關(guān)注。NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞在妊娠期產(chǎn)生Th2的免疫平衡，當(dāng)這種平衡被打破，即產(chǎn)生各種病理妊娠，并可能誘導(dǎo)產(chǎn)程的發(fā)動(dòng)。人類分娩發(fā)動(dòng)的機(jī)理至今仍是個(gè)迷，目前人們轉(zhuǎn)向組織水平、免疫水平找尋分娩動(dòng)因。母-胎界面

2、免疫微環(huán)境由蛻膜中的免疫活性細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子組成，母體的免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)包括抗原特異T細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、NK細(xì)胞、γδT細(xì)胞、NKT細(xì)胞和細(xì)CTL細(xì)胞等，它們共同參與調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡構(gòu)成妊娠期Th2偏倚的免疫微環(huán)境，使母體對(duì)胎兒產(chǎn)生特異性免疫耐受以維持妊娠。已有的研究證實(shí)，NK細(xì)胞大量存在于妊娠早期蛻膜并與胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞密切接觸，在妊娠中發(fā)揮重要作用(其中70％左右為CD56brightCD16+NK細(xì)胞)，而在妊娠晚期則明

3、顯減少。最近大量的研究發(fā)現(xiàn)，NKT細(xì)胞也參與了母胎耐受的形成。在人妊娠早期的蛻膜和外周血中存在NKT細(xì)胞的表達(dá)，人蛻膜組織富集TCRαβ+CDl61+非恒定型NKT細(xì)胞(也稱為II型NKT細(xì)胞，non-iNKT cell)并表現(xiàn)了顯著的Th2型偏移(產(chǎn)生IL-4)，為機(jī)體提供一個(gè)Th2型的微環(huán)境，并發(fā)現(xiàn)該群NKT細(xì)胞具有免疫抑制作用。提示蛻膜組織中的非恒定型NKT細(xì)胞可能通過提供一個(gè)Th2型的微環(huán)境從而抑制胎兒排斥和維持正常的妊娠。本研

4、究采用流式細(xì)胞熒光測(cè)定技術(shù)檢測(cè)孕足月分娩發(fā)動(dòng)前后外周血和蛻膜組織單個(gè)核細(xì)胞中NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞構(gòu)成及其表面NKG2D受體和NKG2A受體表達(dá)情況的變化，并進(jìn)一步檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中Th1/Th2平衡的變化及NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞分泌Th1、Th2型細(xì)胞因子的情況，探討其與分娩發(fā)動(dòng)的關(guān)系，揭示NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞在分娩發(fā)動(dòng)中的作用。并進(jìn)一步研究母胎界面趨化因子CXCR4的表達(dá)情況，試圖探討其與分娩發(fā)動(dòng)前后NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞重新分布之間

5、的關(guān)系。研究外周血及蛻膜組織中NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞的功能狀態(tài)與分娩發(fā)動(dòng)的關(guān)系，無疑從一個(gè)全新的角度詮釋分娩這一生理現(xiàn)象，也為揭示妊娠時(shí)限異常疾病的發(fā)生機(jī)制及最終有效防治提供新思路，并為生殖免疫的發(fā)展提供新的理論依據(jù)。
　　 目的：檢測(cè)分娩發(fā)動(dòng)前后蛻膜及外周血中NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞的含量、表型、Th1/Th2型細(xì)胞因子表達(dá)方面的變化，探討NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞獨(dú)特的表型、功能與分娩發(fā)動(dòng)之間的重要聯(lián)系。檢測(cè)母胎界面趨化因子CXCR4表

6、達(dá)的變化，以發(fā)現(xiàn)其與NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞在產(chǎn)程發(fā)動(dòng)后在母胎界面重新分布及功能變化的聯(lián)系。探討母胎免疫平衡在分娩發(fā)動(dòng)中的作用。
　　 方法：⑴收取正常晚孕分娩組(實(shí)驗(yàn)組，32例)和正常晚孕剖宮產(chǎn)組(對(duì)照組，34例)壁蛻膜組織及同一人外周血，機(jī)械研磨法聯(lián)合密度梯度離心法分離出蛻膜單個(gè)核細(xì)胞，單純密度梯度離心法分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)蛻膜及外周血中NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞的含量及表型。⑵流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)正常晚孕分娩組和剖宮產(chǎn)組

7、外周血中Th細(xì)胞平衡的變化及NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞內(nèi)Th1/Th2型細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4的表達(dá)。⑶收取正常晚孕自然分娩及剖宮產(chǎn)孕婦壁蛻膜及胎盤組織(各6例),RT-PCR方法檢測(cè)胎盤及壁蛻膜中CXCR4的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：①與剖宮產(chǎn)組相比，分娩組蛻膜中NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞的構(gòu)成低于剖宮產(chǎn)組,外周血中NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞構(gòu)成高于剖宮產(chǎn)組(P＜0.01），兩組蛻膜中NK細(xì)胞構(gòu)成均高于外周血(P＜0.01)。②蛻膜單個(gè)核細(xì)

8、胞中，分娩組CD56+NKG2A+細(xì)胞、CD56+NKG2D+細(xì)胞、NK細(xì)胞表面NKG2A、NKG2D受體表達(dá)均低于剖宮產(chǎn)組(P＜0.05)。兩組中NKT細(xì)胞表面NKG2A、NKG2D受體表達(dá)無顯著差異(P＞0.05)。③外周血單個(gè)核細(xì)胞中，分娩組CD56+NKG2A+細(xì)胞構(gòu)成、NK細(xì)胞表面NKG2A受體表達(dá)低于剖宮產(chǎn)組,(P＜0.05)。CD56+NKG2D+細(xì)胞構(gòu)成、NK細(xì)胞表面NKG2D的表達(dá)及NKT細(xì)胞表面NKG2A/NKG2D

9、受體的表達(dá)高于剖宮產(chǎn)組,(P＜0.01)。④外周血單個(gè)核細(xì)胞中，分娩組外周血CD3+T細(xì)胞中Th1細(xì)胞含量高于剖宮產(chǎn)組(P＜0.01），Th2細(xì)胞含量與剖宮產(chǎn)組無差異(P＞0.05）。分娩組NKT細(xì)胞、NK細(xì)胞分泌IFN-γ的能力高于剖宮產(chǎn)組。分娩組NKT細(xì)胞分泌IL-4的能力高于剖宮產(chǎn)組，NK細(xì)胞分泌IL-4的能力與剖宮產(chǎn)組無顯著差異。⑤兩組胎盤、胎膜均有CXCR4表達(dá)，剖宮產(chǎn)組胎盤、胎膜上CXCR4表達(dá)相對(duì)高于分娩組。