二倍體草莓EMS誘變?nèi)后w庫的構(gòu)建及誘變基因的克隆.pdf

1、二倍體野生草莓（Fragaria vesca，2n=14）作為薔薇科的模式植物，具有植株矮小、生長周期短、基因組小和易轉(zhuǎn)化等優(yōu)點(diǎn)，是理想的果實(shí)發(fā)育研究的模式材料。最近隨著草莓全基因組測序的完成，二倍體草莓作為功能基因組研究的模式植物引起了越來越多的重視，其中重要的工作之一是獲得草莓豐富的遺傳突變體庫。根據(jù)相關(guān)突變體的篩選、分析和鑒定，進(jìn)而研究這些基因在植物體內(nèi)的生理生化功能，為揭示果實(shí)發(fā)育等過程的調(diào)控機(jī)制提供依據(jù)。
　　本研究擬采

2、用化學(xué)誘變劑甲基磺酸乙酯（EMS）對(duì)二倍體草莓（F. v esca）種子進(jìn)行誘變，以期得到二倍體草莓的誘變?nèi)后w庫，為草莓正向遺傳學(xué)的研究打好基礎(chǔ)。本研究主要結(jié)果如下：
　　1.EMS誘變處理二倍體野生草莓品種YW5AF7，得到了593個(gè)誘變株系。通過對(duì)M2代的初步篩選，初步獲得了5株具有研究價(jià)值的突變體表型，如葉片皺縮、葉緣光滑和葉柄呈現(xiàn)與野生型不同顏色等。
　　2.找到了1個(gè)具有晚開花、葉片小、葉柄短、葉片窄和葉片數(shù)多等多

3、種表型的突變體，突變體編號(hào)為S229。根據(jù)遺傳學(xué)分析表明，該基因?yàn)閱位虿⑶沂请[性突變。對(duì)基因組重測序數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，造成該突變體表型的基因位于6號(hào)染色體上，且2個(gè)基因由于發(fā)生了提前終止成為首選候選基因。
　　3.序列分析表明：候選基因FvRGA3（gene15980）沒有保守結(jié)構(gòu)域和同源基因。RT-PCR結(jié)果顯示，F(xiàn)vRGA3基因的提前終止并不影響其mRNA水平。
　　4.將 FvRGA3基因的超表達(dá)載體進(jìn)行煙草瞬

4、時(shí)轉(zhuǎn)化，結(jié)果表明，該基因編碼的蛋白質(zhì)位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。將FvRGA3基因的超表達(dá)載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)化到擬南芥中，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因擬南芥與野生型相比無顯著表型。
　　5.獲得4株正常倍性的FvRGA3-RNAi轉(zhuǎn)基因陽性苗，同時(shí)也獲得了15株染色體加倍的FvRGA3-RNAi轉(zhuǎn)基因苗。倍性正常的陽性苗無顯著表型，染色體加倍的陽性苗有待進(jìn)一步研究。
　　綜上所述，本研究成功地獲得1個(gè)小型的草莓EMS誘變突變體庫，篩選出S229突變體的致突