缺血后處理對(duì)兔心肌再灌注損傷的影響.pdf

1、背景與目的 近年來(lái)，隨著臨床冠狀動(dòng)脈內(nèi)溶栓、冠狀動(dòng)脈內(nèi)介入治療及冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)等治療手段的廣泛應(yīng)用，心肌再灌注損傷愈來(lái)愈引起人們的廣泛重視，尋求可行和有效的治療措施以減輕再灌注損傷有著重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。最近Vinten-Johansen實(shí)驗(yàn)室報(bào)道一種新的心肌保護(hù)現(xiàn)象-缺血后處理，即在心肌較長(zhǎng)時(shí)間缺血后，開(kāi)始再灌注時(shí)，對(duì)心臟進(jìn)行短暫再灌、停灌處理可以減少中性粒細(xì)胞聚集、改善內(nèi)皮功能、縮小心肌梗死范圍，與缺血預(yù)適應(yīng)的心肌保護(hù)作用相

2、似。隨后又有研究發(fā)現(xiàn)在再灌注時(shí)應(yīng)用吸入性麻醉劑，能通過(guò)激活磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B(Akt)，(phosphatidylinositol-3-kinase-Akt，P13K-Akt)信號(hào)傳導(dǎo)途徑縮小心肌梗死范圍。現(xiàn)已有一些實(shí)驗(yàn)在大鼠、狗、豬等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心肌缺血再灌注模型上證實(shí)缺血后處理涉及ATP敏感性鉀通道(ATP-sensitire potassium channel，KATP C)的開(kāi)放、P13K-Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑的激活和線粒體

3、通透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrialpermeability transition pore，mPTP)的開(kāi)放等機(jī)制。再灌注過(guò)程中伴隨大量的心肌細(xì)胞凋亡，而凋亡與P13K-Akt信號(hào)傳導(dǎo)途徑和mPTP密切相關(guān)，故推測(cè)后處理可能通過(guò)抑制凋亡來(lái)減輕再灌注損傷。另外有研究報(bào)道線粒體特異性ATP敏感性鉀通道開(kāi)放劑二氮嗪預(yù)適應(yīng)能縮小梗死范圍、抑制凋亡，但在再灌注時(shí)應(yīng)用二氮嗪是否對(duì)心肌有保護(hù)作用還不明確。本研究采取兔在體心肌缺血再灌注模型，以血

4、漿MDA及SOD、心肌梗死范圍、心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況為研究指標(biāo)，觀察缺血后處理和二氮嗪后處理對(duì)再灌注心肌的影響。 材料與方法 建立兔心肌缺血再灌注模型并隨機(jī)分成6組：缺血再灌注組(IR)，缺血預(yù)適應(yīng)組(IP)，缺血后處理4個(gè)循環(huán)組(IPO1)，缺血后處理6個(gè)循環(huán)組(IPO2)，二氮嗪后處理組(DZO)，缺血后處理4個(gè)循環(huán)+二氮嗪后處理組(IPO1+DZO)。①I(mǎi)R組(n=6)：結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(LA

5、D)30min，松開(kāi)再灌注120min；②IP組(n=6)：結(jié)扎LAD 5min，松開(kāi)再灌注5min，反復(fù)3次誘導(dǎo)缺血預(yù)適應(yīng)，之后再按IR組操作；③IPO1組(n=6)：結(jié)扎LAD 30min后，再灌注10s、缺血10s，反復(fù)4次，再灌注120min；④IPO2組(n=6)：結(jié)扎LAD 30min后，再灌注10s、缺血10s，反復(fù)6次，再灌注120min；⑤DZO組(n=6)：結(jié)扎LAD 30min后松開(kāi)再灌注，再灌注前3min按7mg

6、/kg劑量經(jīng)靜脈注射二氮嗪；⑥IPO1+DZO組(n=6)：結(jié)扎LAD 30min后，再灌注10s、缺血10s，反復(fù)4次，同時(shí)再灌注前3min按7mg/kg劑量經(jīng)靜脈注射二氮嗪。再灌注末抽取動(dòng)脈血進(jìn)行血漿丙二醛(MDA)含量和超氧化物酶(SOD)活性檢測(cè)；伊文氏藍(lán)和氯化三苯基四氮唑雙染色法判定心肌梗死范圍；TUNEL法原位檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)；免疫組化SP法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax變化。 結(jié)果 1.血漿MDA含

7、量、SOD活性與IR組相比，IP組、IPO1組、IPO2組、IPO1+DZO組血漿MDA含量下降、SOD活性升高，差異性顯著，IP組、IPO2組、IPO1+DZO組三組之間比較無(wú)顯著性差異，IPO1組與IPO2組相比差異性顯著。IR組與DZO組相比無(wú)顯著性差異。 2.心肌梗死范圍缺血預(yù)適應(yīng)、缺血后處理6個(gè)循環(huán)和缺血后處理4個(gè)循環(huán)與二氮嗪聯(lián)用均縮小再灌注心肌的梗死范圍，且三者之間無(wú)顯著性差異。單獨(dú)應(yīng)用二氮嗪不能縮小梗死范圍。

8、 3.心肌細(xì)胞凋亡缺血預(yù)適應(yīng)、缺血后處理6個(gè)循環(huán)和缺血后處理4個(gè)循環(huán)與二氮嗪聯(lián)用均能抑制再灌注心肌細(xì)胞的凋亡，且三者之間無(wú)顯著性差異。單獨(dú)應(yīng)用二氮嗪不能抑制再灌注心肌細(xì)胞凋亡。 4.凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)缺血預(yù)適應(yīng)和缺血后處理6個(gè)循環(huán)均能減少BaX蛋白的表達(dá)，升高Bcl-2/Bax比值，且兩組間無(wú)顯著性差異。 結(jié)論 1．缺血后處理能減輕脂質(zhì)過(guò)氧化、縮小梗死范圍、抑制細(xì)胞凋亡，應(yīng)的心肌保護(hù)作用相似。 2．缺血后