絲氨酸-蘇氨酸蛋白磷酸酶2A在mTOR信號(hào)通路中的基因表達(dá)研究.pdf

1、背景：
　　 雷帕霉素作為一種免疫抑制劑，其作用靶點(diǎn)mTOR是細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、存活的中心控制者。在生長(zhǎng)因子及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的刺激下，mTOR通過(guò)下游效應(yīng)因子調(diào)節(jié)翻譯相關(guān)的蛋白及核糖體的生成和功能進(jìn)而影響細(xì)胞周期。雷帕霉素通過(guò)抑制mTOR的活性導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞的G1期停滯及阻止其他細(xì)胞從G1期進(jìn)入S1期，因而在臨床上具有免疫抑制及抗腫瘤效應(yīng)。
　　 蛋白磷酸酶2A(PP2A)是真核細(xì)胞中廣泛存在的Ser/Thr蛋白磷酸酶，可對(duì)多種

2、細(xì)胞蛋白脫磷酸化，從而對(duì)多種反應(yīng)起到精細(xì)的調(diào)控作用。由催化亞基C(35KD)和支架亞基A(65KD)組成的核心酶與B亞基形成的三聚體ABC是細(xì)胞中PP2A的高度動(dòng)態(tài)形式，因?yàn)锽亞基至少有26個(gè)成員，分別屬于B、B'、B"、B'''四個(gè)亞族。PP2A功能的發(fā)揮和調(diào)節(jié)依賴于亞基之間的相互作用及翻譯后修飾。目前研究發(fā)現(xiàn)PP2A是mTOR信號(hào)通路中的一個(gè)組成部分。用雷帕霉素抑制mTOR后可引起PP2A相關(guān)的一系列磷酸化/去磷酸化事件，包括S6K

3、1，4E-BP1，JNK-1以及ERK1/2等。
　　 目前關(guān)于雷帕霉素對(duì)PP2A酶活性的影響存在很大的爭(zhēng)議，也是研究的熱點(diǎn)。然而，很少關(guān)于PP2A基因表達(dá)的報(bào)道。因此我們研究的主要目的是探索雷帕霉素對(duì)PP2A轉(zhuǎn)錄水平的影響，從而使我們更好地理解PP2A在mTOR信號(hào)通路中的作用。
　　 目的：
　　 分析雷帕霉素作用于JurkatT淋巴細(xì)胞的過(guò)程中，PP2A各主要亞基的轉(zhuǎn)錄表達(dá)變化，以明確PP2A是否參與了mT

4、OR信號(hào)通路，及其在這個(gè)過(guò)程中的mRNA變化。
　　 方法：
　　 用不同濃度的雷帕霉素(0nM，10nM，100nM，500nM)處理JurkatT淋巴細(xì)胞至12h，24h及48h。用四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)T細(xì)胞的增殖及活力，應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)PP2A各主要亞基(Aa，Aβ，PR55a，PR55δ，PR61γ，PR70,Ca及CB)的mRNA表達(dá)。使用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x

5、±s表示，數(shù)據(jù)錄入SPSS16.0完成統(tǒng)計(jì)分析。以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.001為有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：
　　 雷帕霉素對(duì)Jurkat細(xì)胞生長(zhǎng)及活力有明顯的抑制作用，48小時(shí)藥物的50％抑制濃度是343.3nM。雷帕霉素對(duì)PP2A基因表達(dá)也有劑量和濃度依賴效應(yīng)：500nM雷帕霉素作用細(xì)胞不同時(shí)間后，PP2A各亞基mRNA的表達(dá)在48h明顯下降；而用不同濃度的雷帕霉素處理Jurkat細(xì)胞48h后，各亞

6、基轉(zhuǎn)錄水平也明顯下降，且大部分亞基在100-500nM范圍內(nèi)降到最低。
　　 結(jié)論：
　　 本實(shí)驗(yàn)以人JurkatT淋巴細(xì)胞系為對(duì)象，研究雷帕霉素對(duì)體外共培養(yǎng)T細(xì)胞的作用。研究結(jié)果表明雷帕霉素在體外可以抑制T細(xì)胞增殖及活力。在這個(gè)過(guò)程中伴有PP2A基因的改變，說(shuō)明雷帕霉素可能通過(guò)影響PP2A表達(dá)，進(jìn)而通過(guò)改變其活性對(duì)T淋巴細(xì)胞發(fā)揮作用，這不僅使我們更深入了解mTOR的作用機(jī)制，同時(shí)PP2A相關(guān)蛋白也可能為我們提供預(yù)防免疫