卡價苗接種地區(qū)免疫功能不全患者潛伏性結(jié)核感染免疫學(xué)診斷及免疫學(xué)發(fā)病機制的實驗研究.pdf

1、第一部分：免疫介導(dǎo)炎性疾病人群中潛伏性結(jié)核感染的免疫學(xué)診斷研究
　　目的：評價新型γ干擾素釋放試驗(TSPOT.TB技術(shù))及傳統(tǒng)結(jié)核菌素皮試(tuberculin skin test，TST檢測)在BCG接種地區(qū)免疫介導(dǎo)炎性疾病(immune mediated inflammatory diseases，IMID)患者中檢測潛伏性結(jié)核感染的免疫診斷價值，探討B(tài)CG高接種率地區(qū)該類特殊人群中潛伏性結(jié)核感染者的特異性抗結(jié)核細胞免疫應(yīng)答

2、反應(yīng)。
　　方法：同時應(yīng)用TSPOT.TB檢測及傳統(tǒng)TST檢測方法，對中國東部地區(qū)294例明確診斷的IMID患者及48例正常健康對照者進行潛伏性結(jié)核感染的篩查。比較不同亞組中各檢測方法陽性率、危險因素關(guān)聯(lián)性及抗原特異性宿主免疫應(yīng)答反應(yīng)差異。
　　結(jié)果：IMID患者人群中TSPOT.TB陽性率為27.2％，TST陽性率為51.4％(硬結(jié)直徑≥5mm)或38.4％(硬結(jié)直徑≥10mm)。正常健康對照組中TSPOT.TB陽性率為2

3、0.8％，TST檢測陽性率為64.6％(硬結(jié)直徑≥5mm)或50.0％(硬結(jié)直徑≥10mm)。兩組人群中的TST陽性率均顯著高于TSPOT.TB陽性率(P值均<0.0001)。IMID患者中的TST陽性率低于正常健康對照者，而TSPOT.TB陽性率則高于正常健康對照者。與正常健康人群相比，IMID患者中的潛伏性結(jié)核感染更易被TST檢測漏診或誤診。在IMID患者中，BCG接種史和近期糖皮質(zhì)激素治療史均會對TST結(jié)果產(chǎn)生顯著影響(OR值分別

4、為2.05和0.56，P值均<0.05)，但TSPOT.TB結(jié)果不受這些因素的影響。各人群亞組間的抗原特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)差異也與檢測陽性率差異及危險因素關(guān)聯(lián)性一致。推測在BCG接種地區(qū)使用TST檢測來初篩IMID患者人群中的潛伏性結(jié)核感染時，可能更適宜使用硬結(jié)直徑≥10mm作為TST陽性結(jié)果的Cut-off值。
　　結(jié)論：在BCG高接種率地區(qū)的IMID患者人群中用TSPOT.TB檢測診斷潛伏結(jié)核感染要比TST檢測更為敏感和可靠，尤

5、其對已接受免疫抑制劑治療的IMID患者高危人群有著獨特的應(yīng)用價值。
　　第二部分：HIV陽性感染人群中潛伏性結(jié)核感染的免疫學(xué)診斷研究
　　目的：調(diào)查中國西南地區(qū)HIV合并活動性結(jié)核感染和HIV合并潛伏性結(jié)核感染的疾病負擔，評價新型γ干擾素釋放試驗(TSPOT.TB檢測)及傳統(tǒng)結(jié)核菌素皮試(TST檢測)在BCG高接種率地區(qū)HIV陽性感染人群中用于檢測活動性及潛伏性結(jié)核感染的免疫診斷價值。
　　方法：采用TSPOT.TB檢

6、測技術(shù)共對中國西南地區(qū)100例明確診斷的HIV陽性感染者(其中32例為明確診斷的合并活動性結(jié)核病患者)血液標本進行結(jié)核分枝桿菌抗原特異性T細胞的檢測，同時對所有病例進行TST檢測。
　　結(jié)果：100例HIV感染者中共有32例HIV合并活動性結(jié)核病者(HIV+ATB組)，46例HIV合并潛伏性結(jié)核感染者(HIV+LTB組)和22例單純HIV感染者(HIV+TB-組)。臨床上無活動性結(jié)核感染證據(jù)的HIV陽性感染者中合并潛伏性結(jié)核的感染

7、率高達67.6％。在TST結(jié)果為陰性的HIV感染者中，HIV+ATB患者和無活動性結(jié)核感染證據(jù)的HIV陽性感染者的TSPOT.TB檢測陽性率分別為66.7％(16/24例)和47.5％(19/40例)。在CD4+T細胞計數(shù)<500/μl的HIV感染者中，HIV+ATB患者和無活動性結(jié)核感染證據(jù)的HIV陽性感染者的TSPOT.TB陽性率均顯著高于TST陽性率(66.7％vs.23.8％，55.6％vs.22.2％以及44.4％vs.11.

8、1％，69.2％vs.42.3％，P值均<0.0001)。在抗結(jié)核治療小于1月及CD4+T細胞計數(shù)≥200/gl的HIV+ATB組患者中，TSPOT.TB陽性率高達85％以上；但在抗結(jié)核治療大于3月及CD4+T細胞計數(shù)<200/μl的HIV+ATB組患者中，TSPOT.TB陽性率僅有33.3％。在無活動性結(jié)核感染證據(jù)的HIV陽性感染者中，TSPOT.TB檢測陽性率不受CD4細胞計數(shù)水平影響(P>0.05)；但TST檢測在CD4<200/

9、μl組中的陽性率遠低于CD4≥200/μl組(11.11％vs.46.55％，P<0.05)。
　　結(jié)論：我國無活動性結(jié)核感染臨床證據(jù)的HIV感染人群中有較高的結(jié)核潛伏感染率。與傳統(tǒng)TST檢測相比，新型γ干擾素釋放試驗(TSPOT.TB檢測)在BCG高接種率地區(qū)的HIV陽性感染者中診斷結(jié)核分枝桿菌感染要更加敏感和快速，在HIV合并潛伏性結(jié)核感染的早期快速診斷中有較大應(yīng)用價值。TSPOT.TB檢測不受CD4細胞計數(shù)水平影響，在中國H

10、IV合并潛伏性結(jié)核感染者中可更有效地指導(dǎo)異煙肼預(yù)防性治療及結(jié)核病防控。
　　第三部分：HIV陽性感染人群中潛伏性結(jié)核進展為活動性結(jié)核的免疫學(xué)發(fā)病機制研究
　　目的：評價HIV/AIDS合并潛伏性結(jié)核感染及合并活動性結(jié)核感染者中結(jié)核分枝桿菌肽類抗原特異性CD4+及CD8+T細胞免疫應(yīng)答功能，以及非肽類抗原特異性Vγ2Vδ2+T細胞免疫應(yīng)答功能，探討B(tài)CG高接種率地區(qū)HIV感染人群中潛伏性結(jié)核進展為活動性結(jié)核的免疫學(xué)發(fā)病機制。<

11、br>　　方法：對云南省100例明確診斷的HIV/AlDS感染者按臨床癥狀、胸片和TSPOT.TB檢測結(jié)果分為HIV合并活動性結(jié)核感染(HIV+ATB)組、HIV合并潛伏性結(jié)核感染(HIV+LTB)組及HIV未合并結(jié)核感染(HIV+TB-)組。應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點法(ELISPOT)及細胞內(nèi)細胞因子染色(ICS)技術(shù)檢測各組病例經(jīng)體外抗原刺激后外周血淋巴細胞中結(jié)核分枝桿菌PPD特異性IFNγ+CD4+和IFNγ+CD8+T細胞數(shù)量水平。以及

12、磷酸化抗原HMBPP特異性IFNγ+Vγ2Vδ2+T細胞數(shù)量水平。
　　結(jié)果：PPD特異性IFNγ+CD4+T細胞數(shù)量在HIV+ATB組及HIV+LTB組中均處于較低水平，且與外周血CD4+T細胞計數(shù)水平無關(guān)。但HIV+LTB組患者的PPD特異性IFNγ+CD8+T細胞數(shù)量水平要顯著高于HIV+ATB組。另外，HIV+LTB組患者的HMBPP特異性IFNγ+Vγ2Vδ2+T細胞數(shù)量水平也遠高于HIV+ATB組(P<0.0001)，

13、且這種顯著性差異在CD4+T細胞<200/μl或≥200/μl的HIV+LTB亞組中均存在。在HIV合并潛伏性結(jié)核感染者中，HMBPP特異性IFNγ+Vγ2Vδ2+T細胞數(shù)量甚至是PPD特異性IFNγ+CD8+T細胞數(shù)量的7倍之多。
　　結(jié)論：不同于HIV合并活動性結(jié)核感染者，在我國HIV合并潛伏性結(jié)核感染者的外周血淋巴細胞中可檢測到顯著增強的HMBPP特異性IFNγ+Vγ2Vδ2+T細胞及PPD特異性IFNγ+CD8+T細胞免疫