免疫學檢查

1、1,概述(P411),免疫學（immunology）是研究機體自我識別和對抗原性異物排斥反應(yīng)的一門科學 。臨床免疫學檢查常用于感染性疾病、自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)性疾病、免疫缺陷病、腫瘤等疾病的診斷與療效監(jiān)測。,2,,抗原與抗體,3,特 異 性 體 液 免 疫　　　　　　　絮狀沉淀　沉淀反應(yīng)　 環(huán)狀沉淀　　　　　　 免疫濁度　補體結(jié)合 　　凝集試驗,,,三大標記技術(shù),三大血清反應(yīng),,4,傳統(tǒng)的免疫標記技術(shù)同位素；

2、( 125I 3H ) RIA IRMA　　　　　 熒光抗體技術(shù)(ANA)熒光標記　時間分辯熒光技術(shù)　　　　　 熒光偏振免疫 (TDX)酶標記（ELISA),,其他標記技術(shù),5,,其他標記技術(shù)發(fā)光物標記 　電化學發(fā)光　　金標記技術(shù)　　　硒標記技術(shù)　　　　免疫印跡技術(shù),6,,標記,7,第一節(jié)　免疫球蛋白（Ig）的檢測,8,Ig的產(chǎn)生、結(jié)構(gòu)與功能 Ig通常是指具有抗體活性和(或)抗體樣結(jié)構(gòu)的球蛋

3、白，由漿細胞產(chǎn)生，有特異性識別抗原的功能，但必須與抗原結(jié)合形成免疫復合物后才能啟動效應(yīng)功能。包括：IgG、A、M、D、E,9,一、IgG,參考值：7.0-16.6g/L, 占70-80％特點：長效、能透過胎盤，抗菌、抗病毒測定方法：單向免疫擴散（手工） 速率散射比濁（儀器）意義：感染、肝病、 SLE、 －多克隆↑ 免疫增殖、多發(fā)性骨髓瘤－單克隆↑ 減低：免疫缺陷、重鏈病、輕鏈

4、病、 腎病、免疫抑制劑…等,10,二、IgA,參考值：0.7-3.5g/L，存在于各種分泌物中特點：分泌型(SIgA）:粘膜抵抗力 血清型：單體方法：同上意義：↑粘膜抵抗力、IgA單克?。╩onoclonal）　　　　 感染、多克隆增高 ↓反復呼吸道感染 非IgA單克隆，如SLE、 免疫缺陷等,11,三、IgM,參考值：0.5-2.6g/L,占5-10％特

5、點：五聚體，大分子 如天然凝集素抗A、抗B意義：早期抗體，出現(xiàn)早，消失快。 感染初期、巨球蛋白血癥　　　　降低情況同上類似　　　　方法同上。,12,四、IgD、IgE,IgD:含量低、作用不很明確IgE：含量最少，0.1-0.9mg/L 變態(tài)反應(yīng)如過敏、寄生蟲病有關(guān)　　　　過敏、哮喘、嗜酸性細胞增多癥 　　　　降低情況與上類似　　　　ELISA法測定,13,五、血清

6、M蛋白測定檢測方法：血清蛋白電泳、免疫電泳主要疾病及M蛋白：　多發(fā)性骨髓瘤：IgG、IgA 、IgE 少見IgD 　巨球蛋白血癥：大量IgM　重鏈?。?Ig重鏈　輕鏈?。?Ig輕鏈,14,M蛋白血癥,M：Monoclonal,15,第二節(jié)　補體的測定,補體是一組具有酶原活性的糖蛋白一、總補體活性“CH50”測定 溶血素（抗體）致敏綿羊紅細胞 　補體 溶血 總補體活性＝(1/血清量)×稀釋倍數(shù) 正常

7、參考值：50-100ｋu/L,,,16,總補體活性CH50測定,,,,17,CH50的臨床意義補體傳統(tǒng)途徑的活化程度增高：急性感染、組織損傷、惡性腫瘤降低：免疫復合性疾?。I炎)、SLE、 肝病，重癥營養(yǎng)不良,18,二、C3與C4測定,C3含量最高，傳統(tǒng)、旁路途徑都需C3激活　　(是激活的關(guān)鍵) 含量: C3:0.8-1.5g/L C4:0.44-0.66g/L 方法：單向免疫擴散法

8、（SRID) 同Ig測定 速率散射免疫比濁法 補體測定的意義：↑：炎癥、腫瘤 ↓：腎炎、自身免疫病,19,第三節(jié)　細胞免疫的測定,一、T細胞亞群的測定 1.E花環(huán)（RFC) 原理：T細胞表面具SRBC受體 正常 58-72％左右 2.淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗（LCT) 原理：淋T PHA 淋母細胞 正常：同上 意義：T細胞數(shù)量↓

9、免疫缺陷、腫瘤、免疫病,,20,3．淋巴細胞分化抗原測定 T細胞：CD3-總T標志 CD4-TH標志 CD8-Ts標志 B細胞： CD19、CD20、CD22等　　　　細胞的熒光免疫標記技術(shù)　　　　流式細胞儀的應(yīng)用,21,四、細胞因子測定 1.白介素2（IL-2)或IL-2R 2.腫瘤壞死因子（TNF) 3.干擾素（IFN) ELISA法，科研，非

10、特異 各組分檢測意義不同。,22,第四節(jié) 腫瘤標志物檢測（P418）,腫瘤標志物（tumor marker)是指在腫瘤發(fā)生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身合成、釋放或者是由機體對腫瘤細胞反應(yīng)而產(chǎn)生的一類物質(zhì)。這類物質(zhì)可反映細胞惡變各階段表型及基因特征性。腫瘤標志物檢測的意義是：腫瘤普查、輔助診斷、觀察療效和判斷預后。,23,一、蛋白質(zhì)類1.AFP（甲胎蛋白）： 胎兒早期肝臟合成的糖蛋白，對診斷肝細胞癌有重要臨床意義。

11、 [方法]：RIA；ELISA；化學發(fā)光 [參考值]：300μg/L,24,2.CEA（癌胚抗原）： [方法]：RIA；ELISA；化學發(fā)光 [參考值]：<5μg/L [臨床意義]：非特異性--部分惡性腫瘤，特別是消化道腫瘤患者中可升高，對腸癌復發(fā)、轉(zhuǎn)移有重要意義。,25,3.組織多肽抗原（略）4.PSA（前列腺特異抗原）－－存在于前列腺管道的上皮細胞中，在前列腺癌時血清水平明顯升高，敏感性、特異性高。 游離PS

12、A的檢測及其PSA/fPSA比值,26,5.鱗狀上皮癌抗原（SCC)參考值：血清<1.5μg/L 臨床意義：鱗狀上皮癌，肺、宮頸癌二、糖類抗原腫瘤標志物,27,1. CA199－－胰腺癌和消化道癌時，患者血清 CA199水平可明顯升高. 2.CA125（癌抗原125）－－為一種糖蛋白性腫瘤相關(guān)抗原，存在于卵巢腫瘤的上皮細胞內(nèi)，對診斷卵巢癌有較大臨床價值。3.CA153（癌抗原153）－－對乳腺癌有重要的輔助診斷作用

13、,28,腫瘤標志物的臨床應(yīng)用,篩查：高危人群診斷、良/惡鑒別：輔助指標療效觀察：外科—手術(shù)切除/殘瘤/姑息 保守—藥效、放療效果4 預后：病員分群,標志物: 5 隨訪……,29,第五節(jié)　自身抗體檢測 （P423）,--自身免疫病是指免疫系統(tǒng)對自身成分的免疫耐受性減低或破壞，產(chǎn)生自身抗體損傷含有相應(yīng)自身抗原的組織器官而造成的疾病。,30,一、類風濕因子（RF） 是變性IgG刺激機體產(chǎn)生的一種

14、自身抗體 方法：膠乳凝集法；RIA；ELISA 臨床意義：類風濕性疾病時，RF ↑，70-90％ 其他自身免疫性疾病， RF 亦可↑,31,二、抗核抗體檢測1.ANA:　是一種泛指抗各種細胞核成分的自身抗體，是血清中存在的一類和自身組織細胞的細胞核發(fā)生反應(yīng)的自身抗體的總稱。 無器官和種屬特異性臨床意義：陽性多見于未治療的SLE，陽性率達80％一100％，亦可見于其他自身免疫性疾病。,32,2.抗ds

15、-DNA抗體：　靶抗原是細胞核中DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu) 方法：免疫熒光法、放射免疫法 [臨床意義]　SLE的高特異性試驗，但敏感性較低，活動期SLE陽性率70％-90％,33,3.可提取性抗原抗體譜（ENA） 可提取性核抗原多肽抗體譜－包括抗Sm、核糖體、ScL70、Jo－1、SSB、SSA和RNP等的抗體。 [方法]免疫印跡 [臨床意義] （見P424 表4-8-2） 抗Sm抗體：SLE的特異性標志之一 ，抗dsDNA和

16、抗Sm抗體同時檢測，可提高SLE診斷率。 抗SSA、SSB抗體－－干燥綜合征 抗RNP抗體--混合性結(jié)締組織病,34,第六節(jié)　感染的免疫學檢查　　　　?。≒434）　一、細菌感染免疫　１．抗“O”抗體測定 抗溶血性鏈球菌(感染）抗體 溶血法 膠乳法：<500u 速率散射法 意義：風濕、風濕性關(guān)節(jié)炎、風濕性心臟病、 腎炎時↑同時測血沉,35,２．肥達氏反應(yīng)：原理：是利用傷寒和副

17、傷寒沙門菌菌液為抗原，檢測病人血清中有無相應(yīng)抗體的一種凝集試驗。傷寒第三周后陽性率達80%，初期陰性方法：直接凝集法　　 H<1:160 鞭毛抗原 記憶反應(yīng) O<1:80 甲<1:80 乙<1:80 副傷寒 丙<1:80,,36,二、病毒感染的免疫學檢測（一）TORCH弓型蟲、風疹、巨細胞病毒、單純泡疹（三）性傳播疾病的免疫學檢測（STD)　　　支原體、衣原

18、體　（金標法）　 　　　梅毒　初篩RPR、確診T-PHA　　　HIV 初篩ELISA、蛋白印跡試驗,37,（一）梅毒感染檢測 1.篩選試驗：RPR－快速血漿反應(yīng)素試驗 2.確診試驗：TPHA－梅毒螺旋體血凝試驗（二）HIV感染檢測 1.篩選試驗：ELISA法測HIV抗體 2.確診試驗：蛋白印跡試驗或RT-PCR測HIV-RNA,38,第九章（P452） 　 第四節(jié) 肝炎血清標志物測定,一、甲

19、型肝炎 IgM抗體（ELISA法測定）：現(xiàn)實感染，診斷意義 IgG抗體（ELISA法） ：流行病學意義,39,二、乙型肝炎 1.最常用的檢測項目（兩對半-見表4-5-4） 方法：ELISA、放射免疫法（RIA），發(fā)光免疫法 2.乙肝DNA定量PCR檢測：病毒復制的指標 正常：PCR(-)或<10-3 Copy / ml 拉米夫定(賀普丁）、干擾素治療效果主要指標。,40,乙肝常見的檢