氨氯地平對oxLDL誘導HUVEC-12細胞株CD40表達的影響及其機制.pdf

1、研究背景:CD40信號途徑在介導炎癥細胞活化和體液免疫過程中起著重要作用,研究發(fā)現(xiàn)活化的內皮細胞存在CD40高表達并介導多種炎癥因子表達,參與動脈粥樣硬化(As)斑塊形成、發(fā)展及破裂的諸多環(huán)節(jié)。課題組的早期研究發(fā)現(xiàn)鈣通道阻滯劑(CCB)類藥物具有顯著的抗As作用,這種作用并不完全依賴于降壓效應,但具體機制仍不清楚。本研究擬觀察第三代鈣通道阻滯劑氨氯地平對血管內皮細胞CD40表達的影響,初步探討氨氯地平抗As的可能機制。
　　目的:

2、從炎癥反應角度,觀察氨氯地平對oxLDL誘發(fā)的HUVEC-12內皮細胞CD40表達的影響,并對其機制進行探討,為氨氯地平抗As提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1、培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞株(HUVEC-12細胞),利用 RT-PCR技術檢測CD40mRNA表達,Western-blot技術檢測CD40蛋白水平,篩選oxLDL誘導HUVEC-12細胞CD40高表達的最佳劑量和時間;
　　2、以LOX-1抑制劑多聚肌苷酸(PI

3、A)預處理HUVEC-12細胞,檢測CD40mRNA和蛋白表達;
　　3、不同濃度氨氯地平預處理HUVEC-12細胞,與 oxLDL共同孵育24h后,利用RT-PCR技術檢測HUVEC-12細胞 CD40mRNA的表達,細胞免疫化學染色和Western-blot技術檢測CD40蛋白的表達;觀察不同濃度氨氯地平對LOX-1基因表達的影響,探討氨氯地平下調CD40表達的機制。
　　結果:
　　1、CD40在靜息狀態(tài)的HUV

4、EC-12細胞上少量表達,oxLDL對HUVEC-12細胞CD40的表達有明顯促進作用,oxLDL在0-50μg/ml的濃度范圍內,隨oxLDL濃度增加,CD40的表達亦隨之上調,當oxLDL濃度為50μg/ml時,CD40表達達峰值,當濃度為100μg/ml時,內皮細胞上CD40表達下降。用50μg/ml的oxLDL與內皮細胞孵育0-24h,隨著處理時間的延長,CD40表達逐漸增加,在24h時,CD40的表達為最大值。
　　2、

5、LOX-1抑制劑PIA250μg/ml預處理細胞1h后,明顯降低50μg/ml oxLDL孵育24h誘導的內皮細胞CD40表達。
　　3、氨氯地平對oxLDL誘導的HUVEC-12細胞CD40高表達有明顯的下調作用,氨氯地平在0.1-10μmol/L的濃度范圍內,隨氨氯地平濃度增加,CD40的表達逐漸下調,當氨氯地平濃度為1.0μmol/L時,CD40表達明顯下調;10μmol/L時,CD40表達下調至最低水平。氨氯地平對oxLD

6、L誘導的HUVEC-12細胞LOX-1基因表達亦有下調作用,隨氨氯地平濃度增加,LOX-1mRNA的表達逐漸下調。
　　結論:
　　1、oxLDL可以誘導HUVEC-12細胞CD40表達上調;
　　2、阻斷LOX-1受體可以下調oxLDL誘導的HUVEC-12細胞CD40高表達;
　　3、氨氯地平對oxLDL誘導的HUVEC-12細胞CD40高表達有下調作用,并隨濃度增大而作用加強。氨氯地平的這種作用可能與下調L