VIP對(duì)jurkat淋巴細(xì)胞株CD4表達(dá)的影響及其可能機(jī)制.pdf

1、研究背景：
　　血管活性腸肽（Vasoactive intestinal peptide，VIP）是一種常見(jiàn)的神經(jīng)肽，已有大量研究證實(shí)腫瘤細(xì)胞可分泌VIP，并且對(duì)多種免疫細(xì)胞均有調(diào)節(jié)作用，可促進(jìn)CD4+T淋巴細(xì)胞向Th2分化，但其對(duì)于T淋巴細(xì)胞CD4/CD8表型的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。Thpok是T淋巴細(xì)胞分化中重要而必需的轉(zhuǎn)錄因子，在陽(yáng)性選擇過(guò)程中促進(jìn)雙陽(yáng)性T淋巴細(xì)胞向CD4+T淋巴細(xì)胞分化，并且維持成熟T淋巴細(xì)胞CD4的表型及抑制C

2、D8分子的表達(dá)。Thpok與轉(zhuǎn)錄因子Runx3的相互拮抗作用環(huán)是調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞CD4/CD8分化的關(guān)鍵，而GATA3則在此過(guò)程中與Thpok表現(xiàn)出協(xié)同作用。T淋巴細(xì)胞的分化過(guò)程目前已逐漸明了，但關(guān)于已分化成熟的T淋巴細(xì)胞表型的改變的研究卻很少。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中CD4表達(dá)較癌旁組織明顯升高，轉(zhuǎn)錄因子 Thpok也呈現(xiàn)相應(yīng)的變化，因此，我們推測(cè)腫瘤細(xì)胞可能通過(guò)分泌VIP促使已分化成熟的T淋巴細(xì)胞表型發(fā)生改變，并且該變化與 Thp

3、ok等轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)。為此，我們?cè)O(shè)計(jì)體外實(shí)驗(yàn)探究 VIP對(duì) jurkat淋巴細(xì)胞株CD4表達(dá)的影響及其可能機(jī)制。
　　目的：
　　體外實(shí)驗(yàn)探究VIP對(duì)jurkat淋巴細(xì)胞株CD4表達(dá)的影響及其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　分別檢測(cè)不同淋巴細(xì)胞株jurkat與molt-4之間CD4/CD8的表達(dá)及轉(zhuǎn)錄因子Thpok、Runx3及 GATA3之間的差異；用 VIP分別作用于靜息狀態(tài)下的 jurkat細(xì)胞及經(jīng)PMA+離子

4、霉素活化的jurkat細(xì)胞后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)經(jīng)藥物作用后的各組細(xì)胞CD4及CD8表達(dá)的變化情況，用熒光定量PCR及免疫印跡法分別檢測(cè)Thpok、GATA3、Runx3的mRNA及蛋白變化。分析不同淋巴細(xì)胞株之間CD4/CD8表型不同的原因，探究各實(shí)驗(yàn)組間jurkat細(xì)胞CD4表達(dá)差異的可能的機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1. jurkat細(xì)胞表面有VPAC1和VPAC2表達(dá)；
　　2. jurkat細(xì)胞高表達(dá)CD4，mol

5、t-4細(xì)胞高表達(dá)CD8（p＜0.05）；jurkat細(xì)胞的Thpok及Runx3的表達(dá)水平均明顯高于molt-4細(xì)胞（p＜0.05），但二者間Thpok的差異更為顯著；
　　3.當(dāng)10-6M VIP作用于jurkat細(xì)胞時(shí)，Thpok的表達(dá)明顯上調(diào)（P＜0.05）， VIP作用于jurkat細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)濃度為10-6M；
　　4．jurkat細(xì)胞活化后CD4、CD8的表達(dá)均上調(diào)，聯(lián)合VIP作用后CD4表達(dá)進(jìn)一步增加（p＜0.0

6、5）；
　　5．a(chǎn).jurkat細(xì)胞活化后Thpok mRNA表達(dá)上調(diào)，聯(lián)合VIP作用后進(jìn)一步增加（p＜0.05）；b.jurkat細(xì)胞活化后 Runx3 mRNA及蛋白表達(dá)均明顯上調(diào)（P＜0.05）；c.VIP刺激靜息狀態(tài)下的jurkat細(xì)胞GATA3蛋白表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì)。
　　結(jié)論：
　　1.已分化成熟的jurkat細(xì)胞仍具有可塑性，活化后CD4、CD8的表達(dá)均可上調(diào)；
　　2. VIP可誘導(dǎo)活化狀態(tài)下jurk