SIRT2抑制劑調節(jié)胰島素分泌的機制.pdf

1、研究目的和背景:蛋白乙?；侵匾姆g后修飾手段，分別由乙?；D移酶（HATs）和去乙?；福℉DACs）催化乙酰輔酶A來源的乙酰基與蛋白質肽鏈中賴氨酸殘基的結合及解離過程。最初發(fā)現(xiàn)組蛋白和某些核轉錄因子的乙?；揎梾⑴c調控基因的轉錄表達，隨著蛋白質組學新方法的出現(xiàn)，越來越多存在乙?；揎椀牡鞍踪|被發(fā)現(xiàn)，幾乎涉及所有細胞功能相關生物學過程的調節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)除了通過組蛋白和轉錄因子調節(jié)基因轉錄之外，蛋白乙?；揎椷€可以通過廣泛影響酶蛋白功能

2、狀態(tài)而對多條代謝通路實現(xiàn)快速調節(jié)，對細胞代謝及生長的影響廣泛而深刻，開拓了細胞代謝調節(jié)領域新的研究模式和研究方向。
　　2型糖尿病嚴重危害人類健康，胰島功能紊亂是其發(fā)生和發(fā)展過程中的重要環(huán)節(jié)，因此對胰島功能調節(jié)機制的研究及保護因子的尋找不僅對深入了解2型糖尿病的發(fā)病過程有重要意義，而且對于該疾病的預防和治療也具有實際意義。乙?；瘡V泛參與調節(jié)細胞代謝和生長等一系列研究成果的發(fā)表，為胰島功能的研究提供了新的科研思路，在對代謝變化非常敏

3、感的β細胞中，蛋白乙酰化是否參與調節(jié)胰島素分泌還知之甚少。
　　隨著乙酰化調節(jié)代謝的機制研究日益受到關注，多種去乙酰化酶抑制劑相繼問世，在蛋白乙酰化研究中應用廣泛，為深入了解蛋白乙?；瘜毎x和相關功能的影響及其調節(jié)機制提供了研究工具。本研究將系統(tǒng)觀察各HATs和HDACs在大鼠胰島和MIN6細胞的表達譜，并觀察各類去乙?；敢种苿σ葝u素分泌的影響，明確蛋白乙?；欠駞⑴c調節(jié)胰島功能并探討其可能的作用機制。
　　材料與方

4、法:1)采用熒光實時定量PCR技術檢測各HATs和HDACs在大鼠胰島及MIN6細胞的表達譜；2)分別用Ⅰ、Ⅱ型HDAC抑制劑TSA和Ⅲ型HDAC抑制劑NAM處理大鼠胰島，觀察其對胰島素分泌的影響；3)采用免疫熒光技術觀察Ⅲ型HDAC家族成員SIRT2在胰腺組織切片、MIN6細胞的表達與分布；4)用SIRT2特異抑制劑AGK2處理胰島，觀察其對胰島素分泌的影響；5)用Western Blot檢測AGK2對細胞骨架蛋白α-tubulin乙

5、?；降挠绊憽?br>　　結果:1）熒光實時定量PCR建立了HATs和HDACs在大鼠胰島和MIN6細胞的表達譜；2）5mM NAM處理原代分離的大鼠胰島1h，不影響基礎胰島素分泌，但可以顯著增加16.7 mM葡萄糖刺激的胰島素分泌（GSIS），200nM TSA處理胰島1h，對基礎胰島素分泌和GSIS均沒有顯著影響；3）在3.3mM葡萄糖條件下，NAM處理胰島16h能夠輕度促進胰島素分泌，TSA處理胰島12h可顯著增加胰島素分泌，處

6、理24h可使胰島素分泌增加達20倍；4）免疫熒光結果顯示，SIRT2主要在胰腺中的胰島細胞表達，在單個胰島β細胞及MIN6細胞中，SIRT2主要位于胞漿中；5）SIRT2特異性抑制劑AGK2能夠顯著抑制急性GSIS，對IBMX、Forskolin和KCl等非代謝性刺激物引起的胰島素分泌沒有影響；6）在基礎葡萄糖濃度下用500μmol/L甲苯磺丁脲或100μmol/L二氮嗪+35mmol/L KCl均可以造成細胞內高鈣狀態(tài)，并增加胰島素分

7、泌，此時加入高濃度葡萄糖不會進一步增加細胞內鈣離子濃度，但可以進一步增加胰島素分泌，被認為是胰島素分泌的擴大途徑在起作用。5μmol/L AGK2對500μmol/L甲苯磺丁脲或100μmol/L二氮嗪+35mmol/L KCl引起的胰島素分泌均沒有影響，但能顯著抑制擴大途徑引起的胰島素分泌；7） Western Blot結果顯示AGK2抑制胰島素分泌的同時伴有構成細胞骨架的微管蛋白α-tubulin乙?；矫黠@上調。
　　結論