白藜蘆醇對肺腺癌細(xì)胞A549增殖與凋亡的影響.pdf

1、[目的]：
　　本研究通過檢測白藜蘆醇作用肺腺癌細(xì)胞A549后細(xì)胞存活率變化、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變、檢測細(xì)胞凋亡率及凋亡相關(guān)蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表達，探討白藜蘆醇對肺腺癌細(xì)胞A549增殖與凋亡的影響及可能作用機制。
　　[方法]：
　　1.培養(yǎng)肺腺癌A549細(xì)胞株，實驗分別設(shè)立空白對照組及實驗組，空白對照組加

2、等體積生理鹽水，各實驗組加入不同濃度的白藜蘆醇。
　　2.采用MTT法檢測不同濃度(25μM、50μM、100μM、150μM)白藜蘆醇處理A549細(xì)胞24、48、72h后其存活率的變化。
　　3.在顯微鏡下觀察不同濃度(25μM、50μM、100μM)白藜蘆醇處理A549細(xì)胞48h后細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。
　　4.采用流式細(xì)胞儀及AnnexinⅤ/PI雙染法檢測不同濃度(25μM、50μM、100μM)白藜蘆醇處理A549

3、細(xì)胞24h后細(xì)胞凋亡情況。
　　5.采用Western blot檢測不同濃度(25μM、50μM、100μM)白藜蘆醇處理A549細(xì)胞24h后凋亡相關(guān)蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表達。
　　[結(jié)果]：
　　1.白藜蘆醇對肺癌A549的增殖抑制作用:
　　(1) MTT法檢測細(xì)胞增殖情況:
　　不同濃

4、度(25μM、50μM、100μM、150μM)Res分別處理A549細(xì)胞24、48、72h后，發(fā)現(xiàn)Res在該濃度范圍內(nèi)可明顯抑制A549細(xì)胞的增殖，呈現(xiàn)時間依賴性和濃度依賴性。經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析，25μM濃度Res作用24、48h后細(xì)胞存活率與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，25μM濃度Res作用72h及更高濃度的Res作用24、48、72h后細(xì)胞存活率與對照組比較差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，25μM、50μM、10

5、0μM、150μM的Res分別處理24、48h后，各組之間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，25μM、50μM、100μM、150μM的Res處理72h后，除100μM與150μM組外，各組之間比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　(2)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化:
　　不同濃度的Res(25μM、50μM、100μM)分別處理A549細(xì)胞48小時后，與空白對照組相比，發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞增殖受

6、到明顯抑制，細(xì)胞數(shù)量逐漸明顯減少，細(xì)胞形態(tài)變得細(xì)長，呈細(xì)線樣，細(xì)胞邊界不清晰。
　　2.采用流式細(xì)胞儀及AnnexinⅤ/PI雙染法檢測不同濃度(25μM、50μM、100μM)Res處理A549細(xì)胞24h后細(xì)胞凋亡的情況，發(fā)現(xiàn)Res誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡呈劑量依賴性，各組細(xì)胞平均凋亡率(23.5％、34.2％、43.1％)與空白對照組相比(11.1％)明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　3.采用Western

7、blot檢測不同濃度(25μM、50μM、100μM)Res處理A549細(xì)胞24h后凋亡相關(guān)蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)Res可呈濃度依賴性的方式上調(diào)cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP蛋白表達，其表達趨勢均較空白對照組增高。
　　[結(jié)論]：
　　白藜蘆醇能以時間及濃度依賴的方式抑制肺腺癌A549細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其凋亡，可能是通過活化casp