ERK信號(hào)通路在A549肺腺癌細(xì)胞增殖和凋亡中的作用.pdf

1、目的：明確ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路是否與A549肺腺癌細(xì)胞的增殖和凋亡有關(guān),通過(guò)阻斷ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路是否可以增加A549細(xì)胞的凋亡率,進(jìn)而為NSCLC靶向治療方案的制定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：用不同濃度Fn(10ng/ml和20ng/ml)處理A549肺腺癌細(xì)胞,采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖的變化。選擇濃度為20ng/ml的Fn與不同濃度的ERK信號(hào)通路抑制劑U0126(10μM,20μM和40μM)作用于A549細(xì)胞,用CCK

2、-8法檢測(cè)細(xì)胞的抑制率變化；首先用AO/EB熒光染色法觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化,再分別采用流式細(xì)胞術(shù)、TUNEL原位末端標(biāo)記法和DNA凝膠電泳法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況:①Fn可以促進(jìn)A549肺腺癌細(xì)胞增殖且作用有明顯的時(shí)間-劑量依賴(lài)性,10μg/ml與20ng/mlFn處理組細(xì)胞的增殖明顯高于對(duì)照組(p<0.01),處理組間也有明顯差異(p<0.01)；②ERK信號(hào)通路抑制

3、劑U0126作用于A549細(xì)胞后,10μMU0126組A549細(xì)胞抑制率明顯低于20μMU0126組和40μMU0126組(p<0.01),但后兩組細(xì)胞的抑制率無(wú)明顯差異(P>0.05)。2.細(xì)胞凋亡情況①AO/EB熒光染色法:可見(jiàn)凋亡細(xì)胞體積縮小,染色質(zhì)呈固縮狀,活細(xì)胞染色質(zhì)著綠色并結(jié)構(gòu)正常,而死亡細(xì)胞核染色質(zhì)呈橘紅色但結(jié)構(gòu)正常。②流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果:各實(shí)驗(yàn)組的A549細(xì)胞凋亡率均明顯高于對(duì)照組(p<0.01),10μMU0126組細(xì)胞的

4、凋亡率明顯低于20μMU0126組和40μMU0126組(p<0.01),但后兩組間的凋亡率無(wú)明顯差異(p>0.05)。③TUNEL原位末端標(biāo)記法結(jié)果:不同濃度U0126實(shí)驗(yàn)組的A549細(xì)胞凋亡率均高于對(duì)照組(p<0.01),10μMU0126組A549肺腺癌細(xì)胞的凋亡率明顯低于20μMU0126組和40μMU0126組(p<0.01),但20μMU0126組和40μMU0126組的細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯差異(p>0.05)。④DNA凝膠電泳

5、結(jié)果:各個(gè)實(shí)驗(yàn)組可以看到明顯的凋亡梯形帶。
　　 結(jié)論:1.Fn可以促進(jìn)A549肺腺癌細(xì)胞的增殖,并與Fn濃度呈正相關(guān)；2.通過(guò)U0126阻斷ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路可以抑制A549肺腺癌細(xì)胞的增殖,表現(xiàn)在細(xì)胞的抑制率明顯增加,但這種抑制作用不隨抑制劑U0126濃度增加而繼續(xù)增加；3.ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路與A549肺腺癌細(xì)胞的凋亡有關(guān),通過(guò)ERK通路抑制劑的作用,A549細(xì)胞的凋亡率明顯增加；4.對(duì)于ERK信號(hào)通路的研究,可能為臨床非小