全反式維甲酸對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549增殖的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過(guò)體外研究維甲類(lèi)化合物的衍生物全反式維甲酸（all—trans retinoic acid，ATRA）對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞株的作用，探討ATRA對(duì)A549人肺腺癌細(xì)胞株增殖的影響及其可能的機(jī)制。 方法：（1）培養(yǎng)肺腺癌A549細(xì)胞：將肺腺癌A549細(xì)胞株接種在25ml培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，以含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液，在5%CO2、37℃孵箱進(jìn)行培養(yǎng)。（2）取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的常規(guī)培養(yǎng)的肺腺癌A549細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)按A

2、TRA作用細(xì)胞的時(shí)間分為作用細(xì)胞24小時(shí)，48小時(shí)和72小時(shí)三個(gè)時(shí)間段，每個(gè)時(shí)間段再按藥物濃度分為1×10—7mol/L（第2組），1×10—6mol/L（第3組），1×10—5mol/L（第4組），1×10．4mol/L（第5組）四組藥物濃度組和不加藥的對(duì)照組（第1組）共5組，每組10個(gè)實(shí)驗(yàn)孔。待各實(shí)驗(yàn)濃度的藥物作用細(xì)胞于各實(shí)驗(yàn)時(shí)間段后，用四甲基偶氮唑鹽法（MTT法）進(jìn)行測(cè)定，分別檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞的吸光度值，計(jì)算在各時(shí)間段各實(shí)

3、驗(yàn)濃度藥物對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。（3）選擇適宜的作用時(shí)間和藥物濃度用免疫細(xì)胞化學(xué)S—P（streptavidin—peroxidase）法測(cè)定血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）和基質(zhì)金屬蛋白酶—2（MMP—2）的表達(dá)，培養(yǎng)同樣時(shí)間不加藥的細(xì)胞作對(duì)照組，比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞漿內(nèi)VEGF和MMP—2的表達(dá)是否有差異。 結(jié)果：（1）當(dāng)不同實(shí)驗(yàn)濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細(xì)胞24小時(shí)后：10—7mol/L濃度組，106mol/L濃度組分

4、別與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05），表明此兩組濃度組作用細(xì)胞24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯的抑制作用；10—5mol/L濃度組，10—4mol/L濃度組分別與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05），表明對(duì)細(xì)胞有明顯的抑制作用；相鄰各實(shí)驗(yàn)組之間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）；綜上，用不同濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細(xì)胞24小時(shí)后，當(dāng)達(dá)到一定的藥物濃度時(shí)對(duì)細(xì)胞有抑制作用。（2）當(dāng)不同實(shí)驗(yàn)濃度組的ATRA作用肺腺癌A

5、549細(xì)胞48小時(shí)后：10—7mol/L濃度組與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05），表明此組濃度組作用細(xì)胞48小時(shí)后對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯的抑制作用；10—6mol/L濃度組，10—5mol/L濃度組和10—4mol/L濃度組分別與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05），表明對(duì)細(xì)胞有明顯的抑制作用；相鄰各實(shí)驗(yàn)組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）；綜上，用不同濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細(xì)胞48小時(shí)后，當(dāng)達(dá)到一定的藥物

6、濃度時(shí)對(duì)細(xì)胞有抑制作用，且隨著濃度越大抑制越明顯。（3）當(dāng)不同實(shí)驗(yàn)濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細(xì)胞72小時(shí)后：10—7mol/L濃度組，10—6mol/L濃度組，10—5mol/L濃度組，和10—4mol/L濃度組分別與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05），表明各濃度組對(duì)細(xì)胞均有抑制作用；相鄰各實(shí)驗(yàn)組之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）；綜上，用不同實(shí)驗(yàn)濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細(xì)胞72小時(shí)后，隨著實(shí)驗(yàn)組濃度

7、的升高，抑制作用愈加明顯。（4）選擇10—4mol/L濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細(xì)胞72小時(shí)后，可見(jiàn)VEGF在細(xì)胞漿里的表達(dá)下降，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．01），表明VEGF可能參與了ATRA對(duì)細(xì)胞抑制的過(guò)程。（5）選擇10—4mol/L濃度組的ATRA作用肺腺癌A549細(xì)胞72小時(shí)后，可見(jiàn)MMP—2在細(xì)胞漿里的表達(dá)下降，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．01），表明MMP—2可能參與了ATRA對(duì)細(xì)胞抑制的過(guò)程