不同方式的準分子激光表面切削術后角膜創(chuàng)傷愈合反應的實驗研究.pdf

1、隨著準分子激光角膜屈光手術的發(fā)展,角膜表面切削術因為不存在角膜瓣相關并發(fā)癥,擴大了近視手術的矯治范圍以及術后成像質量高等優(yōu)勢而重新受到關注。然而,角膜上皮下霧狀混濁(Haze)的發(fā)生是制約角膜表面屈光手術的一個重要因索。Haze是準分子激光角膜表面切削術后一定時間在角膜切削區(qū)出現的上皮及其下方基質的霧狀混濁,是準分子激光角膜表面切削術后的主要并發(fā)癥之一。不同的角膜表面切削方式術后Haze的發(fā)生率也不同。Haze不僅影響視力,還是造成屈光

2、回退的主要原因。Haze的形成是一個復雜的角膜創(chuàng)傷愈合反應過程,由多種細胞和因子參與調控,是多種因素共同作用的結果。近年來,角膜表面屈光手術后Haze形成的機制及防治已成為屈光手術研究的熱點。本研究通過建立機械法準分子激光上皮瓣下角膜磨鑲術(Epi-LASIK)、去瓣的Epi-LASIK(off-flap Epi-LASIK)和準分子激光屈光性角膜切削術(PRK)動物模型,旨在從病理組織學角度和分子生物學水平,比較不同方式的準分子激光角

3、膜表面切削術后角膜創(chuàng)傷的愈合反應和Haze產生的差異,來探討Haze-形成的機制,為臨床上準分子激光治療屈光不正的術式選擇和Haze的防治提供理論依據。
　　 第一部分兔Epi-LASIK、去瓣的Epi-LASIK和PRK術后早期角膜創(chuàng)傷愈合反應的對比研究
　　 目的:通過比較兔Epi-LASIK,off-flap Epi-LASIK and PRK三種角膜表面切削術,探討不同的手術方式及術后不同的角膜上皮愈合方式對早期

4、角膜刨傷愈合反應的影響。
　　 方法:健康新西蘭白兔共50只(100只眼),將其中48只(96只眼)隨機分為Epi-LASIK,off-flap Epi-LASIK and PRK三個手術組,每組32只眼,另2只兔(4只眼)未手術眼作為正常對照組。3％成巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(1ml/kg體重)和0.5％愛爾卡因表面麻醉后,實驗眼分別行Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術,且每只兔的兩

5、只眼分別隨機行不同的手術方式。Epi-LASIK術應用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,準分子激光切削后再將上皮瓣復位,覆蓋在切削區(qū)上;off-flap Epi-LASIK術是用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,完成激光切削后,再將上皮瓣去除:PRK術用角膜上皮刮刀鈍性機械去除角膜上皮,去除角膜上皮的直徑為9.0mm,將上皮刮除干凈后行激光切削。采用美國博士倫公司Technolas217型準分子激光治療儀在實驗眼均行-10.0D激光切削,切削深

6、度120m。分別在術后4小時、1天、3天和7天共四個時間點處死各組動物,取角膜進行如下實驗觀察:1.采用光鏡、透射電子顯微鏡觀察三種手術后角膜上皮的愈合方式。2.免疫組織化學方法檢測角膜基質炎癥細胞數量、角膜基質細胞凋亡數量以及自細胞介素-1(IL-1β)和增殖蛋白Ki-67在角膜基質的表達。
　　 結論:Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種危膜表面切削術由于術中不同的上皮處理方式及術后不同的上皮

7、愈合方式引起術后早期角膜創(chuàng)傷愈合反應程度的差異。其中off-flap Epi-LASIK的反應程度最輕,提示off-flap Epi-LASIK可能在減輕角膜表面切削術的術后早期刺激癥狀和遠期Haze發(fā)生率方面具有一定的優(yōu)勢。
　　 第二部分兔Epi-LASIK、去瓣的Epi-LASIK和PRK術后Haze形成的對比研究
　　 目的:探討Epi-LASIK,off-flap Epi-LASIK and PRK三種角膜表面

8、切削術后在Haze發(fā)生發(fā)展方面存在的差異及成因。
　　 方法:健康新西蘭白兔共47只(94只眼),將其中45只(90只眼)隨機分為Epi-LASIK,off-flap Epi-LASIK and PRK三個手術組,每組30只眼,另2只兔(4只眼)未手術眼作為正常對照組。3％戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(1ml/kg體重)和0.5％愛爾卡因表面麻醉后,實驗眼分別行Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表

9、面切削術,且每只兔的兩只眼分別隨機行不同的手術方式。Epi-LASIK術應用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,準分子激光切削后再將上皮瓣復位,覆蓋在切削區(qū)上;off-flap Epi-LASIK術是用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,完成激光切削后,再將上皮瓣去除;PRK術用角膜上皮刮刀鈍性機械去除角膜上皮,去除角膜上皮的直徑為9.0mm,將上皮刮除干凈后行激光切削。采用美國博士倫公司Technolas217型準分子激光治療儀在實驗眼均行-10

10、.0D激光切削,切削深度120μm。三種角膜表面切削術后,進行如下實驗觀察:1、定期在裂隙燈顯微鏡下觀察角膜上皮的愈合情況并記錄每個手術組兔角膜上皮的愈合時間及進行Haze的分級評估。2、分別于術后1周、1個月和3個月共三個時間點處死各組動物,取角膜。通過透射電鏡對兔術后不同時間點角膜的組織結構進行觀察;采用免疫組織化學、免疫印跡法(Western Blot法)等檢測方法測定與Haze形成密切相關的指標α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和

11、Ⅲ型膠原在角膜中的表達。
　　 結論:Epi-LASIK手術中上皮瓣的保留對促進術后角膜上皮的愈合、減少Haze形成沒有明顯的意義,角膜表面切削術中盡量減少對角膜上皮的損傷,是防治術后Haze形成的關鍵因素。Off-flap Epi-LASIK與Epi-LASIK和PRK比較,術后角膜上皮愈合快、Haze反應輕,有望成為臨床上優(yōu)先選擇的角膜表面屈光手術方式。
　　 第三部分兔Epi-LASIK、去瓣的Epi-LASIK和

12、PRK術后
　　 角膜中TGF-β1和CTGF的表達及其對Haze形成的影響
　　 目的:通過觀察Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術后角膜中轉化生長因子-β1(TGF-β1)和結締組織生長因子(CTGF)的表達情況,探討兩者之間的關系及其對術后Haze發(fā)生發(fā)展的影響。
　　 方法:健康新西蘭白兔共47只(94只眼),將其中45只(90只眼)隨機分為Epi-LASIK

13、,off-flap Epi-LASIK and PRK三個手:術組,每組30只眼,另2只兔(4只眼)未手術眼作為正常對照組。3％戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(1ml/kg體重)和0.5％愛爾卡因表面麻醉后,實驗眼分別行Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術,且每只兔的兩只眼分別隨機行不同的手術方式。采用美國博士倫公司Technolas217型準分子激光治療儀在實驗眼均行-10.0D激光切削,切削深度

14、120μm。分別于術后1周、1個月和3個月共三個時間點處死各組動物取角膜,采用免疫組織化學和免疫印跡法(Western Blot法)檢測Haze形成過程中的兩個主要調控因子TGF-β1和CTGF在三種手術后角膜中的表達情況。
　　 結論:TGF-β1和CTGF介導了角膜表面切削術后角膜創(chuàng)傷的愈合反應,在愈合反應過程中具有協同作用,與Haze的發(fā)生發(fā)展關系密切。Off-flap Epi-LASIK術后各時間點角膜中TGF-β1和C