腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1-CD82與宮頸癌相關(guān)性研究.pdf

1、本研究擬通過檢測腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1/CD82在宮頸癌組織中的蛋白表達(dá)狀況，以及觀察它對宮頸癌Caski細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響，對該基因與宮頸癌侵襲和轉(zhuǎn)移的相關(guān)性作一初步探討，通過檢測人乳頭瘤病毒HPV16E6、E7，HPV18在宮頸癌組織中的感染情況，探討HPV是否影響KAI1/CD82基因的表達(dá)。 方法：采用免疫組化LsAB法對70例浸潤性宮頸癌，15例原位癌，20例正常宮頸組織以及29例轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的石蠟標(biāo)本進(jìn)行KAI1

2、/CD82蛋白表達(dá)檢測，分析KAI1/CD82與宮頸癌臨床分期、病理分級、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸間質(zhì)肌層浸潤深度等病理特點(diǎn)的關(guān)系；采用PCR擴(kuò)增-瓊脂糖凝膠電泳法檢測浸潤性宮頸癌以及原位癌組織中人乳頭瘤病毒HPV16E6、E7，HPV18的DNA狀況；分析HPV16E6、E7，HPV18感染與KAI1/CD82蛋白表達(dá)的相關(guān)性；通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將真核表達(dá)質(zhì)粒PCMV-KAI1cDNA導(dǎo)入低表達(dá)的宮頸癌高轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系Caski，通

3、過MTT法測生長曲線以及粘附實(shí)驗(yàn)、侵襲力小室觀察細(xì)胞體外生長、體外侵襲能力以及對人工細(xì)胞外基質(zhì)的粘附情況。 結(jié)果：1.KAI1/CD82在宮頸浸潤癌組織及原位癌中的蛋白表達(dá)與正常宮頸上皮中的表達(dá)相比明顯下調(diào)(P＜0.05)，主要位于上皮細(xì)胞的胞膜，在癌細(xì)胞中還表達(dá)于胞漿，在癌組織中以不均勻性灶性分布為主，原位癌與浸潤癌中的表達(dá)差異無顯著性(P＞0.05)。 2.KAI1/CD82的蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床分期、病理類型、淋巴

4、結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤以及宮頸間質(zhì)肌層浸潤深度均無相關(guān)性(P＞0.05)；KAI1/CD82在高中分化組中的蛋白表達(dá)高于低分化組(P＜0.05)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)有強(qiáng)有弱，與其原發(fā)灶中的表達(dá)相比無差異(P＞0.05)。 3.HPV16E6、E7，HPV18在浸潤性宮頸癌和原位癌中的陽性率無顯著性差異(P＜0.05)，與臨床分期、病理分級、淋巴轉(zhuǎn)移、脈管浸潤以及宮頸間質(zhì)肌層浸潤深度均無相關(guān)性(P＞0.05)，HPV16E6感染主要

5、與鱗癌關(guān)系密切(P=0.009)，陽性率為75.5％，HPV18在腺癌中的陽性率高于鱗癌。 4.HPV16E6、E7，HPV18感染與KAI1在宮頸癌中的蛋白表達(dá)下調(diào)無直接相關(guān)性(P＞0.05)，即HPV16E6、E7，HPV18可能并不是導(dǎo)致KAI1在宮頸癌中蛋白表達(dá)下調(diào)的重要因素。 5.通過脂質(zhì)體成功轉(zhuǎn)染PCMV-KAI1于宮頸癌Caski細(xì)胞后，細(xì)胞免疫組化證實(shí)轉(zhuǎn)染目的基因的Caski-Kai1細(xì)胞中KAI1/CD

6、82蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。 6.轉(zhuǎn)染KAI1cDNA的宮頸癌Caski細(xì)胞的體外增殖能力明顯弱于轉(zhuǎn)染空載體組與未轉(zhuǎn)染組(P＜0.05)，而后二者之間無差異(P＞0.05)。7.體外粘附實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染KAI1cDNA的Caski-Kai1細(xì)胞對人工細(xì)胞外基質(zhì)的異質(zhì)性粘附能力強(qiáng)于Caski和轉(zhuǎn)染空載體的Caski-vector細(xì)胞(P＜O.05)，Caski和Caski-vector細(xì)胞的粘附能力無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05

7、)。 8.Transwell侵襲力小室試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Caski-Kai1組細(xì)胞穿膜數(shù)量明顯少于Caski和Caski-vector組，差異有顯著性(P＜0.05)，而Caski和Caski-vector組無明顯差異，說明KAI1/CD82對細(xì)胞體外侵襲能力有抑制作用。 2結(jié)論：腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KAI1/CD82對宮頸癌細(xì)胞體外增殖運(yùn)動侵襲能力有一定影響，但對宮頸癌組織的惡性侵襲行為可能不是一個(gè)主要影響因素，通過擴(kuò)大樣本含量以及