游離脂肪酸對糖尿病大鼠心臟腎臟病理改變的影響.pdf

1、目的:對雄性糖尿病Wistar大鼠外源性輸注脂肪乳,提高大鼠血液中游離脂肪酸(Free fatty acids,FFA)的濃度,通過控制輸注時間,將實驗組大鼠分為2天組、4天組、6天組。各對照組大鼠輸注與相應(yīng)實驗組大鼠相同時間的生理鹽水,觀察脂毒性對糖尿病大鼠心肌細胞和腎小球的病理改變的影響以及對心肌和腎小球上局部細胞因子白介素-6(IL-6)表達的影響。
　　 方法:
　　 1.糖尿病大鼠模型制作:雄性Wistar大鼠

2、單籠高脂飼料喂養(yǎng)4周、腹腔注射低劑量鏈脲佐菌素(STZ)(40 mg/Kg)一次后,繼續(xù)高脂喂養(yǎng)72小時,行血糖檢測,FBG≥11.1 mmol/L者為DM大鼠。
　　 2.分組:將DM大鼠按照隨機數(shù)字表編號,分入輸注生理鹽水的對照組(NS組)和輸入脂肪乳的實驗組。按照輸注持續(xù)的時間又分為2天組、4天組、6天組。
　　 3.頸靜脈穿刺插管:DM大鼠手術(shù)前禁食8-12小時,3％戊巴比妥鈉(4mg/Kg)腹腔注射麻醉,待麻醉

3、滿意后,常規(guī)消毒并切開皮膚,暴露其右側(cè)頸靜脈,行頸靜脈插管,插管遠端穿過皮下固定于大鼠頸背部皮膚處。術(shù)后,每日消毒皮膚固定導(dǎo)管處并用肝素生理鹽水沖洗導(dǎo)管1次,以保持導(dǎo)管通暢。
　　 4.對實驗組和對照組大鼠分別輸入脂肪乳和生理鹽水,輸液速度以微量輸液泵控制在0.6-1ml/h,實驗組輸注20％英脫匹利特和肝素鈉的混合物(英脫匹利特:肝素鈉=1ml:40UI),實驗結(jié)束后,處死動物,迅速分離心臟及兩側(cè)腎臟,測量左側(cè)腎臟質(zhì)量,將心腎

4、組織用4％中性甲醛固定,用于制作切片,進行HE染色和免疫組化組織染色在輸液前后,分別經(jīng)頸靜脈內(nèi)采血,分離血清,待檢測,。
　　 5.觀測指標(biāo):Ellisa法檢測血清FFA,光學(xué)顯微鏡下測量各組大鼠心肌細胞直徑和腎小球面積,根據(jù)公式VG=1.38/1.1×AG3/2算出腎小球平均體積(VG)并計算腎重體重比值,測量各實驗組和對照組的心肌和腎小球的IL-6光密度值,統(tǒng)計各組數(shù)據(jù)之間的差異程度是否有統(tǒng)計學(xué)意義及其相關(guān)系數(shù)。
　　

5、 結(jié)果:
　　 1.輸注脂肪乳后,實驗組大鼠的血清FFA水平明顯升高,與對照組相比升高了2-4倍。實驗組大鼠隨著脂肪乳輸注時間的增加,腎重體重比值漸變大,4天組、6天組有統(tǒng)計學(xué)意義,與游離脂肪酸相關(guān)系數(shù)為0.782,P＜0.01。實驗組大鼠的腎小球體積隨著脂肪乳輸注時間的增加而增加,實驗2天組腎小球體積增大就有統(tǒng)計學(xué)意義,與血清中游離脂肪酸相關(guān)系數(shù)為0.837,P＜0.01,與腎小球IL-6的表達相關(guān)系數(shù)為0.843,P＜0.

6、01。
　　 2.對照組大鼠腎小球中IL-6基本不表達或弱表達,測量其平均光密度分別為0.1612、0.1583、0.1579;實驗組大鼠IL-6水平較對照組明顯增高,2天組、4天組、6天組光密度分別為0.2173、0.4409、0.5294,2天組開始就有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3.心肌細胞HE染色顯示:實驗組大鼠較對照組大鼠心肌細胞肥大,隨著脂肪乳輸注時間的延長,心肌細胞直徑漸增大,實驗4天組、6天組有統(tǒng)計學(xué)意義。隨著脂

7、肪乳輸注時間延長,心肌細胞局部IL-6表達增多,自2天組就有統(tǒng)計學(xué)意義,與FFA濃度相關(guān)系數(shù)為0.753,P＜0.01,與心肌細胞局部IL-6光密度水平相關(guān)系數(shù)為0.808,P＜0.01。
　　 結(jié)論:
　　 1.高游離脂肪酸引起糖尿病大鼠腎重體重比值增加、腎小球體積增大、心肌細胞肥大、腎小球和心肌細胞局部IL-6表達增加。
　　 2.高游離脂肪酸引起糖尿病大鼠。腎重體重比值增加、腎小球體積增大、心肌細胞肥大的改