鈣蛋白酶小亞基Capn4在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其與預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌是一種源于肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的原發(fā)性腺癌，發(fā)病率在原發(fā)性肝癌中次于肝細(xì)胞肝癌居第二位。雖然肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌較肝細(xì)胞癌少見，但近十年來發(fā)病率有所上升。目前手術(shù)切除是治療肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的首選及最有效的方法，但由于早期診斷困難、手術(shù)切除率低和術(shù)后容易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，患者預(yù)后情況在過去十年內(nèi)沒有明顯提高。因此，研究引起肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌發(fā)生及促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因子在治療腫瘤及改善預(yù)后方面有著重要意義。
　　鈣蛋白酶是一種保守的半胱氨酸

2、蛋白酶，催化眾多特殊基質(zhì)調(diào)控蛋白水解。鈣蛋白酶活性與細(xì)胞骨架重構(gòu)，胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，細(xì)胞凋亡和細(xì)胞存活等一系列基本生理過程密切相關(guān)，其表達(dá)在腫瘤發(fā)生過程中也產(chǎn)生明顯改變。研究發(fā)現(xiàn)鈣蛋白酶小亞基Capn4在維持鈣蛋白酶結(jié)構(gòu)及活性過程中發(fā)揮重要作用，我們先前的實驗也證實了Capn4與原發(fā)性肝細(xì)胞癌的侵襲復(fù)發(fā)密切相關(guān)，且可作為獨(dú)立的預(yù)測預(yù)后指標(biāo)。
　　本研究檢測了Capn4在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者腫瘤組織和癌旁組織中的表達(dá)。利用組織芯片技術(shù)分析

3、驗證Capn4表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系及其預(yù)后價值。通過RNA干擾的方法抑制肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞系Capn4的表達(dá)，觀察其與腫瘤侵襲，遷移和增殖的關(guān)系，并進(jìn)一步研究Capn4對MMP2表達(dá)的影響。對Capn4在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的侵襲與轉(zhuǎn)移中的作用進(jìn)行初步探討。
　　第一部分 Capn4在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中表達(dá)升高
　　目的:研究Capn4在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌和對應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)差異，分析其與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌發(fā)生的關(guān)系。
　　方法

4、:應(yīng)用qRT-PCR、western blot及免疫組化方法檢測Capn4在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者腫瘤組織與對應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)差異，并進(jìn)一步檢測肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌早期復(fù)發(fā)與未復(fù)發(fā)患者的腫瘤組織中Capn4表達(dá)情況。
　　結(jié)果:qRT-PCR、western blot及免疫組化結(jié)果顯示Capn4在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者腫瘤組織中的表達(dá)量高于對應(yīng)癌旁組織，兩者間差異有顯著性（p＜0.05）。早期復(fù)發(fā)患者Capn4表達(dá)較未復(fù)發(fā)患者明顯升高（p＜0

5、.05）。
　　結(jié)論:Capn4在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌腫瘤組織及早期復(fù)發(fā)患者的腫瘤組織中表達(dá)升高，可能在腫瘤發(fā)生與復(fù)發(fā)過程中發(fā)揮重要作用。
　　第二部分 Capn4與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系及診斷預(yù)后的價值
　　目的:檢測Capn4在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中的表達(dá)，研究其與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系及預(yù)后意義。
　　方法:應(yīng)用免疫組化方法檢測140例肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者病理組織中Capn4表達(dá)，SPSS16.

6、0統(tǒng)計分析Capn4與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果:Capn4高表達(dá)與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者的腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)（p＜0.05）。Capn4高表達(dá)組術(shù)后總體生存率明顯低于Capn4低表達(dá)組(p＜0.05)，而累計復(fù)發(fā)率明顯高于Capn4低表達(dá)組（p＜0.05）。單因素及多因素分析顯示Capn4表達(dá)是患者總體生存率和累計復(fù)發(fā)率的獨(dú)立預(yù)后因子，且在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中仍有預(yù)后價值。
　　結(jié)論:Capn4與肝內(nèi)膽管

7、細(xì)胞癌的淋巴侵襲轉(zhuǎn)移及腫瘤TNM分期相關(guān)，具有預(yù)后價值。
　　第三部分下調(diào)Capn4表達(dá)對肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其與MMP2的關(guān)系
　　目的:研究Capn4與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力及MMP2的關(guān)系。
　　方法:應(yīng)用RNA干擾的方法下調(diào)Capn4在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞株HCCC-9810與QBC939中的表達(dá)，經(jīng)qRT-PCR、western blot驗證抑制效率后，應(yīng)用劃痕試驗檢測細(xì)胞遷移能力變化，t

8、ranswell試驗檢測細(xì)胞侵襲能力變化，MTT試驗檢測細(xì)胞增殖能力變化，并進(jìn)一步研究干擾Capn4表達(dá)對MMP2表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:RNA干擾后細(xì)胞株Capn4表達(dá)明顯下調(diào)。在HCCC-9810與QBC939中Capn4干擾組細(xì)胞侵襲遷移能力明顯減弱，增殖能力受Capn4表達(dá)水平影響較?。╬＞0.05）。MMP2表達(dá)與Capn4表達(dá)呈正相關(guān)。
　　結(jié)論:Capn4表達(dá)與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞的侵襲遷移能力及MMP2表達(dá)呈正