低氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)與妊娠期高血壓疾病滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲關(guān)系的初步研究.pdf

1、目的:妊娠期高血壓疾病是妊娠特有的疾病，嚴(yán)重危害母嬰健康，其主要病理生理變化為滋養(yǎng)細(xì)胞淺著床，但確切的發(fā)病機(jī)理仍未闡明。正常妊娠早期，胚胎的發(fā)育是在一個(gè)相對(duì)缺氧的環(huán)境下進(jìn)行，滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮基質(zhì)使胚胎錨定于子宮壁，侵入子宮螺旋動(dòng)脈，使血管直徑擴(kuò)張，增加了母體至胎盤的血液供應(yīng)。孕10周左右，滋養(yǎng)細(xì)胞侵入蛻膜段的子宮螺旋動(dòng)脈肌層，孕14-20周，螺旋動(dòng)脈的生理性變化擴(kuò)展到子宮肌層內(nèi)1/3深度。胎盤淺著床是妊娠期高血壓疾病發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。滋養(yǎng)

2、細(xì)胞侵襲能力下降，侵入子宮壁過(guò)淺，螺旋動(dòng)脈血管重塑欠佳，導(dǎo)致胎盤灌注不足，引起血管內(nèi)皮損傷，從而誘發(fā)妊娠期高血壓疾病。目前，調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的機(jī)制尚不明確，缺氧在其中起關(guān)鍵的作用。 缺氧可通過(guò)誘導(dǎo)PAI-1、VEGF、TGF-β3等表達(dá)而影響滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲過(guò)程；缺氧導(dǎo)致活性氧生成增加也可引起細(xì)胞侵襲力減弱；缺氧也影響細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞向侵襲性表型的分化，從而對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入起一定調(diào)節(jié)作用。 近年來(lái)國(guó)外部分學(xué)者從事缺氧對(duì)滋養(yǎng)細(xì)

3、胞侵襲力的研究。Maternal研究發(fā)現(xiàn)，慢性缺氧時(shí)HIE-1a可以作用于ET-1基因，使其表達(dá)活性增強(qiáng)從而引起血管收縮。Caniggia等檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，HIF-1a在妊娠期高血壓疾病中明顯高表達(dá)，他們推測(cè)HIF-1a作用于早孕期滋養(yǎng)細(xì)胞使其侵襲能力下降出現(xiàn)胎盤淺著床致妊娠期高血壓疾病發(fā)生，但尚無(wú)直接的實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)支持這一假設(shè)。國(guó)內(nèi)關(guān)于HIF-1a與妊娠期高血壓疾病發(fā)病關(guān)系的研究尚未見報(bào)道。 本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)HIF-1a在早孕絨毛中、妊娠期

4、高血壓疾病胎盤及正常妊娠胎盤中的表達(dá)加以比較，了解HIF-1a在胎盤中的表達(dá)情況，將臨床資料與HIF-1a的表達(dá)相結(jié)合，比較其在疾病的發(fā)生及發(fā)展中的變化情況；通過(guò)體外滋養(yǎng)細(xì)胞在常氧及低氧條件下的培養(yǎng)，檢測(cè)出兩組細(xì)胞在生長(zhǎng)特性方面的差異，應(yīng)用Transwell小室檢測(cè)兩組滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲性變化；本實(shí)驗(yàn)將有助于闡明妊娠期高血壓疾病的病理生理過(guò)程，從而為滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲行為調(diào)控機(jī)制的研究提出一定的理論依據(jù)，同時(shí)也可為臨床上妊娠期高血壓疾病的早期診斷、

5、早期預(yù)防及治療提供一種新方法和新思路。 方法:第一部分：收集早期妊娠絨毛、妊娠期高血壓疾病胎盤及正常妊娠對(duì)照組胎盤，冰凍切片，免疫組化法檢測(cè)HIF-1α蛋白質(zhì)在三組中的表達(dá)，原位雜交法檢測(cè)HIF-1αmRNA在三組中的表達(dá)，圖像分析檢測(cè)各組間的差異。 第二部分：采用絨毛組織貼塊法進(jìn)行原代早孕滋養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)，F(xiàn)icoll分離及差速貼壁法進(jìn)行純化，通過(guò)免疫組化檢測(cè)細(xì)胞中CK7及Viminten進(jìn)行鑒定。常氧及3％低氧條件下滋

6、養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)，利用Matrigel膜侵入培養(yǎng)系統(tǒng)，比較兩組細(xì)胞在體外侵襲性的差別，利用MTT法檢測(cè)兩組中細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的差別。 結(jié)果:第一部分：HIF-1α在正常妊娠對(duì)照組胎盤中低表達(dá)，在早期妊娠及妊娠期高血壓疾病患者胎盤中明顯高表達(dá)，患者胎盤中的高表達(dá)與硫酸鎂治療與否無(wú)明顯差別，與疾病的嚴(yán)重程度無(wú)明顯的差別。HIF-1αmRNA在早期妊娠及妊娠期高血壓疾病患者胎盤中明顯高表達(dá)，在正常晚期妊娠者胎盤中表達(dá)下降。 第二部分：常

7、氧下滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲性強(qiáng)，但增殖較慢，而低氧條件下滋養(yǎng)細(xì)胞增殖快，侵襲力低下。 結(jié)論:1.HIF-1α蛋白及mRNA在早孕絨毛及妊娠期高血壓疾病胎盤中表達(dá)均增高，而正常妊娠胎盤中表達(dá)下降，提示HIF-1α在胎盤的形成及妊娠期高血壓疾病發(fā)病的全過(guò)程持續(xù)高表達(dá)，與該病的發(fā)生及演變可能有關(guān)。在妊娠期高血壓疾病胎盤中，HIF-1α表達(dá)與疾病的嚴(yán)重程度、治療與否無(wú)關(guān)，提示胎盤血流灌注下降所致的缺氧改變并不是HIF-1α高表達(dá)的原因，HIF-1