犬頸動脈狹窄支架置入后新生內膜中PTX3的表達及法舒地爾的干預作用.pdf

1、背景:支架內再狹窄是支架置入后血管壁受牽張和損傷引起的以內膜增生為主,以炎癥性愈合反應為特征的病理過程。炎癥細胞及炎癥因子在支架再狹窄中起了重要作用,有效抑制炎性細胞的增殖和減少相關因子的表達可能是防治支架再狹窄的最佳途徑之一。
　　目的:探討犬頸動脈粥樣硬化狹窄支架成形術后新生內膜中正五聚體蛋白3(Pentraxin3,PTX3)的表達情況及法舒地爾對其的干預機制。
　　方法:1、選取健康雄性比格犬19只,適應性普通飼料喂

2、養(yǎng)1周。將實驗動物隨機分組為對照組(n=4)、造模組(n=15),造模組動物在麻醉下行單側頸總動脈氮氣干燥結合球囊擴張術建立頸動脈粥樣硬化狹窄模型,對照組僅分離暴露血管,不進行損傷。術后高脂飼料喂養(yǎng)至頸動脈彩超與動脈血管造影確定模型建立的成功。2、隨機選取4只健康比格犬為對照組(A組,n=4),經前期頸動脈粥樣硬化造模犬8只,分為支架組(B組,n=4)、支架+藥物干預組(C組,n=4)。造影后將8枚金屬裸支架分別置入B、C組一側頸動脈。

3、C組支架置入后靜脈輸注法舒地爾進行干預,A、B組輸注生理鹽水進行對照。術后普通飼料喂養(yǎng)8周,后復查血管造影,觀察支架后血管狹窄情況。造影結束后,獲取目標血管,行HE染色及彈力纖維染色觀察病理形態(tài)學變化,免疫組化染色分析增殖細胞核抗原(PCNA)、巨噬細胞標記因子(CD68)、PTX3表達情況,RT-PCR技術和Western-blot法分別測定PTX3mRNA及蛋白表達情況。采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計量數(shù)據(jù)以xˉ±s表示

4、,組間比較用t檢驗,多組均值比較用單因素方差分析(one-wayANOVA),P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:1、造模后4周與8周彩超結果顯示:8周后造模組內膜中層明顯增厚(IMT)、血流阻力(RI)增大,收縮期血流峰值速度(PSV)、舒張末期血流速度(EDV)、血管內徑減小,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。血管造影結果顯示:造模組狹窄直徑百分比(D-sten％)及狹窄面積百分比(A-sten%)均大于對照組,差異

5、有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2、支架置積百分比均大于A組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),C組狹窄百分比大于A組,B組狹窄百分比大于C組,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。入后8周血管造影結果示:B組狹窄直徑百分比、狹窄面
　　3、病理形態(tài)學觀察:支架置入后8周,A組頸總動脈內膜光滑,為單層內皮細胞,中膜以平滑肌細胞為主,呈長形或橢圓形,外膜為結締組織,無新生血管,管腔呈較規(guī)整圓形。B、C組頸動脈內膜不平整,細胞排

6、列紊亂,可見大量炎性細胞及增生的內皮細胞、平滑肌細胞,新內膜形成。中層平滑肌細胞相對減少,纖維組織增生。細胞外基質成分大量堆積,血管腔狹窄。B、C組新生內膜厚度、新生內膜面積(NIA)、內彈力膜面積(IEM)、管腔狹窄指數(shù)(NIA/IEM)均大于A組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),C組各檢測指標均小于B組,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　4、免疫組化結果:應用專業(yè)圖像分析軟件測得平均光密度值(OD值)進行半定量分析,結

7、果:PTX3、CD68、PCNA在A組中有一定表達。B組三檢測指標OD值均高于A、C組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),C組PTX3OD值高于A組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C組CD68、PCNA表達量OD值高于A組,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　5、PTX3mRNA及蛋白表達結果顯示:A組、C組表達量均低于B組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),A組表達量低于C組,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。PTX3蛋

8、白表達量分析結果同mRNA。
　　結論:1、利用氮氣干燥結合球囊擴張術損傷犬頸動脈內膜,配合高脂飲食,能夠快速有效的建立犬頸動脈粥樣硬化狹窄模型。
　　2、正常頸動脈組織中PTX3有一定表達,頸動脈支架置入術后PTX3在新生內膜中表達明顯增加,說明PTX3參與了支架內再狹窄的形成。
　　3、法舒地爾能抑制PTX3基因和蛋白的表達,減少巨噬細胞浸潤,并抑制平滑肌細胞的遷移和增殖,從而減輕新生內膜形成,這一作用可能有利于支