幽門螺桿菌尿素酶C基因的克隆、表達(dá)及其在血清學(xué)診斷中的應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、幽門螺桿菌(Hp)是一種在胃病患者胃內(nèi)發(fā)現(xiàn)的革蘭陰性彎曲桿菌.Hp是急慢性胃炎及胃十二指腸潰瘍的致病因素.它與胃癌及胃粘膜相關(guān)性淋巴組織(MALT)淋巴瘤的關(guān)系也十分密切.Hp最為重要的特征是含有極為豐富的尿素酶.此酶可以迅速將尿素分解為氨和二氧化碳,在Hp定植及引起胃粘膜損傷的過程中起重要作用.為了表達(dá)Hp ureC重組基因,該研究根據(jù)發(fā)表的Hp序列設(shè)計(jì)了一對引物,應(yīng)用PCR技術(shù)從Hp基因組DNA中擴(kuò)增得到了1179bp的ureC基因

2、片段,經(jīng)BamHI和EcoRI雙酶切后將其克隆到大腸桿菌克隆載體pGEM-3Zf(-)上,經(jīng)測序證實(shí)為ureC基因.將ureC基因亞克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pBV220中,42℃溫度誘導(dǎo)表達(dá)了44KDa的重組蛋白,的24.8﹪,其分子量與預(yù)期的一致.應(yīng)用高效液相色譜技術(shù),該實(shí)驗(yàn)對ureC重組蛋白進(jìn)行了初步的分離和純化.將純化的ureC重組蛋白用做斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)中的抗原,與福建三強(qiáng)公司的斑點(diǎn)金法檢測Hp urease IgG的試劑盒對比

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