中國中西部三省鼠傳巴爾通體多樣性研究.pdf

1、目的：
　　通過本研究掌握中國寧夏、內蒙古和山西省部分區(qū)域鼠形動物巴爾通體的感染情況、宿主構成、遺傳進化特征，為巴爾通體疾病防控提供科學依據(jù)。
　　方法：
　　本次研究選取的調查地區(qū)平均海拔為800~2400 m，年平均氣溫為0.7~19℃，東經105°~116°，北緯35°~45°，涉及3個省份8個地區(qū)的17個采樣點。采用夾夜法捕鼠，用DNA分子條形碼鑒定鼠種，記錄性別，經緯度，海拔高度，棲息環(huán)境等信息，無菌操作取肝

2、臟組織接種于含5％脫纖維羊血的TSA上培養(yǎng)，對疑似菌落做形態(tài)學鑒定，革蘭氏染色鏡檢。粗提取菌落DNA，采用巴爾通體特異性引物擴增gltA基因，電泳分析后將產物測序并比對序列同源性。按照核酸提取試劑盒步驟提取陽性菌株DNA，進一步擴增ftsZ、rpoB和16S rRNA基因并測序，Neighbor—Joining(NJ)建樹分析。計算菌株核苷酸與單倍型多樣性。持續(xù)傳代培養(yǎng)并冷凍保存菌株。
　　數(shù)據(jù)處理采用率進行統(tǒng)計描述，不同組間感染

3、率的對比用χ2檢驗，統(tǒng)計分析運用SPSS19.0軟件完成；經測序所得到的核酸序列，用Chromas軟件來比對峰圖，所測序列經NCBI BLAST進行同源比較和MEGA6.06構建Neighbor—Joining(NJ)樹分析；運用ArcGIS軟件構建采樣地區(qū)鼠類捕獲點和巴爾通體菌株基因型的分布；菌株的核苷酸與單倍型多樣性由DnaSPv5軟件計算。
　　結果：
　　1.巴爾通體感染情況檢測
　　本次研究在2013~201

4、5三年間共采集寧夏、內蒙古和山西省部分地區(qū)鼠形動物標本787份，捕獲13個鼠屬26個鼠種，從12個鼠屬21個鼠種中分離到219株巴爾通體，總體感染率為27.83%；其中內蒙古感染率最高為41.50%（107/256）、寧夏感染率為21.98%（51/232）、山西省感染率為20.40%（61/299）。
　　涉及的鼠種有阿拉善黃鼠、達烏爾黃鼠、赤頰黃鼠、黑線姬鼠、朝鮮姬鼠、大林姬鼠、中華姬鼠、長尾倉鼠、短尾倉鼠、黑線倉鼠、大倉鼠、

5、小家鼠、三趾跳鼠、五趾跳鼠、北社鼠、子午沙鼠、長爪沙鼠、洮州絨鼠、岢嵐絨鼠、布氏田鼠和黑線毛足鼠。各個省份不同地區(qū)巴爾通體的感染率差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；在不同海拔、年均氣溫、棲息環(huán)境、鼠種之間巴爾通體的感染率差異均具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。
　　2.遺傳進化分析
　　將序列比對分析，得出所分離到的菌株主要分六個已知基因型：格拉漢姆巴爾通體（Bartonella grahamii）、伊麗莎白巴爾通體（B.e

6、lizabethae）、非洲跳鼠巴爾通體（B.jaculi）、日本巴爾通體（B.japonica）、泰勒巴爾通體（B.taylorii）和B.washoensis，以及1個未知種。陽性菌株對gltA基因，16S rRNA基因，ftsZ基因和rpoB基因進行擴增測序及比對串聯(lián)分析，寧夏、內蒙古和山西省鼠形動物感染的巴爾通體核苷酸序列存在較大差別。序列多態(tài)性位點很多，單倍型和核酸多樣性很高，經中性檢驗得出巴爾通體的進化方式為負向選擇。