外源性一氧化碳釋放分子(CORM-2)對膿毒癥小鼠神經(jīng)系統(tǒng)抗炎中的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制.pdf

1、背景與目的:
　　 膿毒癥(Spesis)是指由感染引起的全身性炎癥反應(yīng)綜合征(Systemic InflammatoryResponse Syndrome,SIRS),是當(dāng)前創(chuàng)傷、燒傷外科以及ICU所面臨的棘手難題,其進(jìn)一步發(fā)展所導(dǎo)致的膿毒性休克(septic shock,SS)、急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratorydistress syndrome,ARDS)以及多臟器功能不全綜合征(multiple or

2、gan dysfunctionsyndrome,MODS),已成為臨床主要死亡因為之一。盡管現(xiàn)代外科監(jiān)護(hù)技術(shù)和抗生素治療有了很大進(jìn)展,但膿毒癥的死亡率仍然居高不下,因此,膿毒癥及其并發(fā)癥尤其是MODS的防治,仍然是當(dāng)代外科學(xué)領(lǐng)域的難題之一。
　　 一氧化碳(carbon monoxide,CO)在機(jī)體內(nèi)由血紅素加氧酶(HO)催化血紅素產(chǎn)生,CO過去曾被認(rèn)為是破壞細(xì)胞呼吸作用的有害物質(zhì)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)CO是一種氣體信號分子的,在

3、離體和在體模型中對由內(nèi)毒素誘導(dǎo)產(chǎn)生的各種細(xì)胞因子具有顯著的抑制作用,我們前期研究也發(fā)現(xiàn)CO可以有效地緩解急性炎癥反應(yīng),表現(xiàn)出重要的細(xì)胞保護(hù)作用和抗炎效用,但其機(jī)制尚未完全明確。
　　 近來,一種新合成的新型金屬-羰基化合物,一氧化碳釋放分子(tricarbonyldichlororuthenium(Ⅱ)dimer,CORM-2)被證實可以在機(jī)體內(nèi)緩慢釋放CO,擴(kuò)張主動脈,降低心肌缺血再灌注損傷,具有潛在的藥用價值。而目前,有關(guān)外

4、源性CO對膿毒癥神經(jīng)抗炎的影響的相關(guān)研究還比較少。為此,在本研究中,我們通過建立小鼠CLP膿毒癥模型并給予CORM-2干預(yù),進(jìn)行離體和在體的研究,來探討外源性一氧化碳是否在神經(jīng)抗炎中起到一定的作用,并探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 雄性昆明種小鼠,20只,隨機(jī)分為假手術(shù)組、CLP模型組、CORM-2干預(yù)組、卡巴膽堿。分別于于CLP術(shù)后6h,12h,24h麻醉并收集血漿、肺泡灌洗液,腦組織標(biāo)本,處死小鼠。酶聯(lián)免

5、疫吸附實驗(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測血漿中腫瘤壞死因子-α[(tumer necrosis factor-α,YNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)等炎癥因子的表達(dá)；檢測腦組織中乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AcHE)活性,觀察炎癥反應(yīng)過程中中性粒細(xì)胞的聚集程度和其表面膽堿能受體的表達(dá)情況；測腦組織濕干重比(wet／dr

6、y,W／D)；蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色觀察腦組織病理變化。ELISA檢測膿毒癥小鼠體內(nèi)神經(jīng)抗炎遞質(zhì)乙酰膽堿的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 本研究表明,與假手術(shù)組比較,CLP術(shù)后小鼠腦組織充血明顯,大腦間質(zhì)有炎性浸潤,腦室腔內(nèi)可見出血和滲出,并隨時間的演變,腦組織病理改變逐漸加重；血清細(xì)胞因子TNF-α、IL-6表達(dá)明顯增加；小鼠體內(nèi)神經(jīng)抗炎遞質(zhì)乙酰膽堿的濃度和巨噬細(xì)胞表面膽堿受體的表達(dá)都

7、增加,膽堿酯酶的活性也增強(qiáng)。與CLP模型組相比較,CORM-2干預(yù)組和卡巴膽堿組腦間質(zhì)水腫程度減輕,白細(xì)胞浸潤明顯減少；促炎癥因子的表達(dá)明顯受抑制;神經(jīng)抗炎遞質(zhì)乙酰膽堿的濃度和巨噬細(xì)胞表面膽堿受體的表達(dá)較CLP組都有所增加,膽堿酯酶的活性較CLP組有所減弱。
　　 結(jié)論:
　　 本實驗室小鼠膿毒癥模型的建立過程規(guī)范,操作簡單,具有可重復(fù)性,且模型的檢測指標(biāo)明確,在機(jī)體損傷方面達(dá)到了預(yù)期的要求,可用于在動物方面研究炎癥的反