外源性一氧化碳釋放分子(CORM-2)對(duì)脂多糖刺激后血小板α顆粒釋放的抑制作用及分子機(jī)制.pdf

1、背景：
　　膿毒癥(Sepsis)是指機(jī)體由于感染的失控反應(yīng)所導(dǎo)致的全身性炎癥反應(yīng)綜合征(Systemic InflammatoryResponse Syndrome,SIRS)，進(jìn)一步可發(fā)展為威脅生命的多臟器功能不全綜合征（Multiple Organ Dysfunction Syndrome, MODS)，已成為臨床危重癥主要死亡原因之一。膿毒癥時(shí)會(huì)發(fā)生凝血系統(tǒng)活化，并促進(jìn)血栓的形成與發(fā)展。血小板α顆粒的釋放在膿毒癥凝血紊亂中

2、發(fā)揮重要作用。我們前期研究證實(shí)一氧化碳釋放分子-2(CO-releasing Molecules-2,CORM-2)能顯著抑制LPS刺激下血小板的黏附、聚集、釋放功能。但未見(jiàn)關(guān)于CORM-2對(duì)膿毒癥血小板α顆粒釋放的影響的相關(guān)研究。
　　方法：
　　采集健康人靜脈血，建立血小板LPS刺激模型，并使用CORM-2進(jìn)行干預(yù)。酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA）檢測(cè)血小

3、板α顆粒內(nèi)容物血小板衍化生長(zhǎng)因子(Platelet Derived Growth Factor, PDGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinases, MMP)等。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P-選擇素和整合素αIIbβ3的表達(dá)。免疫熒光顯微鏡（ Immunofluorescence Microscope）和透射電子顯微鏡（ Transmission Electron Microscope, TEM）下觀察血小板α顆粒的分

4、布。免疫蛋白印跡（Western Blotting, WB）檢測(cè)血小板的關(guān)鍵信號(hào)分子蛋白激酶Cθ(Protein Kinase Cθ, PKCθ)、Munc18a及其磷酸化的表達(dá)。免疫沉淀反應(yīng)檢測(cè)血小板中Munc18a與可溶性N-乙基馬來(lái)酰亞胺敏感因子附著蛋白受體（ Soluble N-ethylmaleimide-sensitive Factor Attachment Protein Receptor, SNARE）蛋白之間的相互作用

5、。
　　結(jié)果：
　　研究顯示LPS刺激后血小板α顆粒與血小板胞漿膜的融合增加，并促進(jìn)α顆粒內(nèi)容物的釋放；CORM-2能夠有效抑制血小板α顆粒與胞漿膜的融合和α顆粒內(nèi)容物的釋放。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)LPS刺激后血小板整合素αIIbβ3的表達(dá)增加，給予CORM-2干預(yù)后，整合素αIIbβ3的表達(dá)減低。同時(shí)LPS刺激后血小板PKCθ和Munc18a的磷酸化水平顯著增加，以及SNAREs復(fù)合體形成增加，血小板α顆粒釋放增加。CORM-2干