銀杏苦內(nèi)酯B對麻醉大鼠中樞神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響.pdf

1、銀杏(Ginkgo biloba)在地球上已存在約2億年，曾廣泛分布于北半球的歐、亞、美洲，素有裸子植物“活化石”之稱。其種子作為“白果”入藥已有600多年的歷史。 銀杏苦內(nèi)酯(ginkgolides)是銀杏提取物中的一種活性成分，包括銀杏苦內(nèi)酯A、B、C、M、J等，均為強(qiáng)血小板活化因子(Platelet activating factor,PAF)拮抗劑。其中銀杏苦內(nèi)酯B(Ginkgolide B，GB)活性最強(qiáng)，迄今對銀杏苦

2、內(nèi)酯B的藥理作用研究也最為集中。銀杏苦內(nèi)酯競爭性拮抗PAF與其受體的結(jié)合，從而使PAF不能通過G蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)激活磷脂酶C、腺甘酸環(huán)化酶和酪氨酸蛋白激酶，從而阻斷了PAF受體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，阻斷了PAF的生物學(xué)效應(yīng)。 銀杏苦內(nèi)酯對中樞神經(jīng)系統(tǒng)多種疾病有一定的防治作用。保護(hù)腦缺血、減少再灌注損傷，抗阿爾茨海默病(AD)，抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡等諸多方面都表明銀杏苦內(nèi)酯在治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病方面有著光明的前景。 關(guān)于銀杏內(nèi)酯B的中樞保護(hù)作用

3、機(jī)制，特別是電生理不甚明確。海馬結(jié)構(gòu)簡單，易于分離，且與心血管中樞相關(guān)核團(tuán)有纖維聯(lián)系，是神經(jīng)電生理研究常用部位。下丘腦室旁核(paraventricular nucleus，PVN)是非常重要的心血管活動(dòng)調(diào)控整合部位，接受來自海馬的穹隆纖維。目前，有關(guān)銀杏內(nèi)酯B對大鼠中樞神經(jīng)元電生理特性的影響尚未見報(bào)道。 因此本論文對以上兩部位進(jìn)行了研究。 Ⅰ銀杏苦內(nèi)酯B對大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元自發(fā)放電的影響 目的：研究銀杏苦內(nèi)

4、酯B(Ginkgolide B，BN52021)對靜息狀態(tài)下的海馬腦片神經(jīng)元活動(dòng)的影響。 方法：實(shí)驗(yàn)選用20±3天的雄性Sprague-Dawley大鼠。將大鼠快速斷頭，剝?nèi)ワB骨和硬腦膜，取出腦組織，置于0-4℃預(yù)先用95％O2和5％CO2的混合氣體飽和的人工腦脊液中，快速分離出一側(cè)海馬，切成厚度為350-500μm的腦片。然后將腦片移入人工腦脊液中，連續(xù)通以95％O2和5％CO2，室溫下孵育60-90 min。應(yīng)用細(xì)胞外記錄單

5、位放電技術(shù)，觀察銀杏苦內(nèi)酯B對大鼠海馬腦片神經(jīng)元放電的影響。 結(jié)果：(1) 在43個(gè)CA1區(qū)神經(jīng)元放電單位給予銀杏苦內(nèi)酯B(0.1，1，10μmol/L)2分鐘，有42個(gè)放電單位(97.67％)放電頻率明顯降低，且呈劑量依賴性；(2) 預(yù)先用0.2 mmol/L的L-glutamate(L-Glu)灌流海馬腦片，10個(gè)放電單位放電頻率明顯增加，表現(xiàn)為癲癇樣放電，在此基礎(chǔ)上灌流銀杏苦內(nèi)酯B(1μmol/L)2分鐘，其癲癇樣放電全部

6、被抑制；(3)預(yù)先用L型鈣通道開放劑Bay K 8644灌流8個(gè)海馬腦片，8個(gè)單位(100％)全部放電增加，在此基礎(chǔ)上灌流銀杏苦內(nèi)酯B(1μmol/L)2分鐘，7個(gè)放電單位(87.5％)放電頻率明顯減低；(4)在8個(gè)CA1區(qū)神經(jīng)元放電單位上，銀杏苦內(nèi)酯B(1μmol/L)的抑制效應(yīng)可被廣泛鉀通道阻斷劑(tetraethylammonium，TEA)1 mmol/L完全阻斷。 結(jié)論：銀杏苦內(nèi)酯B(Ginkgolide B，BN52

7、021)可抑制海馬神經(jīng)元自發(fā)放電，并可抑制由L-glutamate誘發(fā)的神經(jīng)元放電。提示銀杏苦內(nèi)酯B對中樞神經(jīng)元通過降低其活動(dòng)而具有一定程度的保護(hù)作用，這種作用可能與銀杏苦內(nèi)酯B抑制L型鈣通道有關(guān)，而且可能與延遲整流型鉀通道(delayed rectitier potassium channel，KDR)有關(guān)。 Ⅱ銀杏苦內(nèi)酯B對大鼠下丘腦室旁核神經(jīng)元自發(fā)放電的影響 目的：研究銀杏苦內(nèi)酯B(Ginkgolide B，BN5

8、2021)對靜息狀態(tài)下的下丘腦腦片室旁核神經(jīng)元活動(dòng)的影響。 方法：實(shí)驗(yàn)選用20±3天的雄性Sprague-Dawley大鼠。將大鼠快速斷頭，剝?nèi)ワB骨和硬腦膜，取出腦組織，置于0-4℃預(yù)先用95％O2和5％CO2的混合氣體飽和的人工腦脊液中，根據(jù)解剖學(xué)標(biāo)志切得一塊含有室旁核的下丘腦腦片，厚度為350-500μm，并置入人工腦脊液中，連續(xù)通以95％O2和5％CO2，室溫下孵育60-90 min。應(yīng)用細(xì)胞外記錄單位放電技術(shù)，觀察銀杏苦

9、內(nèi)酯B對大鼠室旁核神經(jīng)元放電活動(dòng)的影響。 結(jié)果：(1) 在27個(gè)下丘腦室旁核神經(jīng)元放電單位給予銀杏苦內(nèi)酯B(0.1，1，10μmol/L)2分鐘，有26個(gè)放電單位(96.30％)放電頻率明顯降低，且呈劑量依賴性；(2)預(yù)先用0.2 mmol/L的L-glutamate(L-Glu)灌流下丘腦腦片，8個(gè)放電單位放電頻率明顯增加，表現(xiàn)為癲癇樣放電，在此基礎(chǔ)上灌流銀杏苦內(nèi)酯B(1μmol/L)2分鐘，其癲癇樣放電全部被抑制；(3) 預(yù)

10、先用L型鈣通道開放劑Bay K8644灌流8個(gè)下丘腦腦片，8個(gè)單位(100％)全部放電增加，在此基礎(chǔ)上灌流銀杏苦內(nèi)酯B(1μmol/L)2分鐘，8個(gè)放電單位(100％)放電頻率明顯減低；(4) 在8個(gè)下丘腦室旁核神經(jīng)元放電單位上，銀杏苦內(nèi)酯B(1μmol/L)的抑制效應(yīng)可被廣泛鉀通道阻斷劑(tetraethylammonium.TEA)1 mmol/L完全阻斷。 結(jié)論：銀杏苦內(nèi)酯B(Ginkgolide B，BN52021)可抑