銀杏苦內(nèi)酯B對大鼠重癥急性胰腺炎胰腺組織PAF-R的影響及機制.pdf

1、重癥急性胰腺炎(SAP)屬病理分型的急性出血壞死型胰腺炎(AHNP)，本病起病急，病情兇險，死亡率高。這種疾病以血流動力學改變和全身炎癥反應(yīng)為特征，并導(dǎo)致多器官功能障礙。SAP的發(fā)病機制至今存在多種學說，臨床尚無有效的治療措施。胰腺微循環(huán)障礙是急性胰腺炎(AP)的啟動、持續(xù)和加劇損害的因素。在本病程過程中，細胞因子的釋放造成了全身性的反應(yīng)，如：全身炎癥反應(yīng)綜合癥(SIRS)、多器官功能障礙綜合征(MODS)、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS

2、)、敗血病等。此外，細胞因子在作為S．AP主要致死原因的多器官衰竭中起著軸心作用。 眾多的細胞因子中，PAF是一種與胰腺微循環(huán)障礙密切相關(guān)的血管活性物質(zhì)。PAF在體內(nèi)主要通過特異性的PAF受體(PAF-R)將信號傳遞至細胞內(nèi)調(diào)節(jié)細胞的生命活動。PAF．R屬于7次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體家族，活化后偶聯(lián)于特異性的異三聚體G蛋白，開啟胞內(nèi)相應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 銀杏苦內(nèi)酯B(Ginkgolide B，代號為BN52021)是血小板

3、活化因子受體(PAF-R)的特異性拮抗劑。為“國寶”銀杏葉提取物中的萜類化合物，近年來國內(nèi)外的研究顯示該化合物治療AP效果顯著，但是具體的作用機制尤其是分子機制缺乏深入研究。 目的:本實驗以Wistar大鼠SAP模型為研究對象，以PAF-R的拮抗劑BN52021進行治療干預(yù)，大體觀察Wistar大鼠SAP模型的制作效果，用比色法技術(shù)檢測血漿淀粉酶的變化，并對胰腺組織進行病理觀察和評分；通過，western blot等技術(shù)檢測大

4、鼠胰腺組織PAF-R的動態(tài)變化。根據(jù)血漿淀粉酶活性、病理學評分和PAF-R表達量變化，評價BN52021對SAP的治療作用和它對大鼠胰腺組織PAF-R的影響，同時結(jié)合前期研究及相關(guān)研究結(jié)果，探討PAF-R在SAP時信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的作用以及BN52021對此過程的治療機制。 方法 雄性Wistar大鼠180只隨機分為正常對照組(NC，n=60)，SAP組(SAP，n=60)及BN‘52021治療組(BN,n=60)，每組按

5、術(shù)后6個不同時相點(1h,2h,3h,6h，12h,24h)再分為6小組，各組10只。麻醉狀態(tài)下，微量注射器逆行膽胰管注射5％?；悄懰徕c(1mL·kg<'-1>)，BN組術(shù)后15分鐘股靜脈注射BN 52021(5mg·kg<'-1>)，NC組、SAP組股靜脈注射等量生理鹽水。各組分別在處理后1h,2h,3h,6h，12h,24h麻醉并開胸和開腹，迅速采集心臟血液和胰腺組織。采用全自動生化分析儀檢測血漿淀粉酶。取胰腺組織HE染色制片，觀察

6、胰腺組織的病理學變化，對其進行病理組織評分。提取胰腺組織蛋白，進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，Western blot測定胰腺組織PAF-R．蛋白含量，用圖像分析系統(tǒng)進行定量分析。 結(jié)果 (1)血漿淀粉酶結(jié)果顯示，SAP組和BN組在各時相點與NC組相比顯著升高(P<0.05)，BN組在1h、2h、3h、6h和24h較SAP組顯著降低(P<0.05)。隨著時間的推移，SAP組胰腺及周圍組織器官水腫、出血和壞死面積逐漸擴大

7、，程度逐漸加重，胸腹腔積液也增多。病理組織評分結(jié)果示，SAP組與BN組各時間點同NC組比較具有顯著差異(P<0.05)。BN組在3h、6h、12h時點與SAP組具有顯著差異(P<0.05)。 (2)胰腺組織中PAF.R的Westem blot結(jié)果顯示，NC組在各時間點變化不明顯，各時間點沒有顯著差異(P>0.05)；SAP組和BN組組內(nèi)各時間點的比較，1h、2h、3h、6h時間點具有顯著差異(P<0.05)，12h、24h時間點無顯著差

8、異(P>0.05)。SAP組和：BN組是動態(tài)變化的，早期逐漸上升，在3h達到高峰(P<0.05)，以后逐漸降低。除1h時間點外，各時間點SAP組與NC組組間有顯著性差異(P<0.05)，BN組較NC組有顯著性差異(P<0.05)，BN組與SAP組無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論: (1)逆行胰膽管內(nèi)注射5％?；悄懰徕c制備大鼠SAP模型是成功的，可靠的；BN52021對大鼠SAP有一定的治療作用。(2)PAF-R在SAP過程