BAG-1在急性白血病中的表達(dá)及其與BCL-2、BAX的相關(guān)性研究.pdf

1、急性白血病是造血細(xì)胞惡性克隆性疾病,其顯著特征是細(xì)胞過度增殖和凋亡受抑,多種癌基因、抑癌基因及其相關(guān)基因功能異常,引起其相應(yīng)蛋白的變化,導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂,細(xì)胞惡性增殖,凋亡受阻,促進(jìn)了白血病的發(fā)生發(fā)展.凋亡在癌形成中起著重要作用,并受幾種基因的調(diào)節(jié).位于9號(hào)染色體上的抗凋亡基因BAG-1(即Bc1-2結(jié)合抗凋亡基因)是1995年從鼠細(xì)胞中克隆出來.已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抗凋亡蛋白BAG-1在人類多種癌細(xì)胞中高表達(dá),尤其是白血病、乳腺癌、前列腺癌和結(jié)腸

2、癌.BAG-1蛋白有四種亞型,即p50(BAG-1L)、p46(BAG-1M)、p33(BAG-1S)和p29,它們是由BAG-1mRNA的不同起始密碼開始翻譯得到的.BAG-1蛋白在結(jié)構(gòu)上有BAG結(jié)構(gòu)域、泛素樣結(jié)構(gòu)域、核定位序列和.TXSEEX重復(fù)序列.四種BAG-1亞型在共同的C末段的BAG-1結(jié)構(gòu)域可以與Bc1-2、Hsp70和Raf-1相互作用;共有的泛素樣結(jié)構(gòu)域可以與蛋白酶體結(jié)合并靶向分子伴侶蛋白HSp70/Hsc70從而調(diào)節(jié)

3、蛋白質(zhì)的降解;N末段似乎在BAG-1與核激素受體的結(jié)合方面起著重要作用.因此,BAG-1蛋白可能通過與其它蛋白(如Bc1-2蛋白、熱休克蛋白、蛋白激酶、核激素受體等)相互作用來抑制凋亡;通過Hsp70/Hsc70途徑、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、轉(zhuǎn)錄途徑、凋亡途徑和蛋白質(zhì)降解途徑等在腫瘤的形成和進(jìn)展中起重要作用.Bc1-2基因位于18號(hào)染色體上,首先是在帶有t(14;18)染色體的濾泡性淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)的.Bc1-2基因家族在凋亡中起著重要作用,抗凋亡基

4、因Bc1-2和促凋亡基因Bax同屬Bc1-2基因家族.BAG-1是一個(gè)抗凋亡蛋白,它不僅有獨(dú)立的抗凋亡作用,而且可以增強(qiáng)Bc1-2的抗凋亡活性.本實(shí)驗(yàn)采用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)BAG-1、Bc1-2以及BaX蛋白在初治急性白血病患者及完全緩解1.研究對(duì)象:(1)初治急性白血病組:共收集標(biāo)本54例,其中男性32例,女性22例,年齡10-75歲(中位年齡35歲).將全部初治急性白血病患者分為兩組:①急性髓系白血病AMU)33例,其中Mo<,0>

5、2例,M<,1>2例,M<,2>16例,M<,3>5例,M<,4>3例,M<,5>3例,M<,6>1例,M<,7>1例;②急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)21例.所有急性白血病患者均依據(jù)FAB分型診斷標(biāo)準(zhǔn)劃分.(2)完全緩解病人30例,為初治組完全緩解后標(biāo)本.(3)對(duì)照組為非惡性血液病骨髓正常者.所有觀察對(duì)象均取自于2006年5月至12月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院就診患者. 2.標(biāo)本處理:化療前采集患者骨髓和對(duì)照者骨髓1ml,分離單個(gè)核細(xì)胞,制備

6、細(xì)胞滴片,采用免疫細(xì)胞化學(xué)法染色檢測(cè)BAG-1、Bcl-2和Bax蛋白在初治AL(Aate leukemia)、AL-CR及正常對(duì)照者骨髓細(xì)胞中的表達(dá). 3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,BAG-1抗原、Bcl-2抗原和Bax抗原陽性率比較采用X<'2>檢驗(yàn),變量間的相關(guān)分析應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析,以α=0/05為檢驗(yàn)水準(zhǔn). 結(jié)果 1.BAG-1在正常人骨髓標(biāo)本中不表達(dá)或呈微弱

7、表達(dá).在初治AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中66.7﹪呈現(xiàn)細(xì)胞核或細(xì)胞漿的陽性和(或)強(qiáng)陽性表達(dá),其中AML,陽性率為63.6﹪ ,ALL陽性率為71.4﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).在.AL-CR.中陽性率為13.3﹪,其中AML-CR陽性率為5.3﹪,ALL-CR陽性率為27.3﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).初治組與正常對(duì)照組(陽性率為5.3﹪),初治組與AL-CR.組之間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)

8、,AL-CR組與對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),且初治AML與AML-CR之間、初治ALL與ALL-CR之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05). 2.Bcl-2在正常人骨髓標(biāo)本中不表達(dá)或微弱表達(dá).在初治AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中55.6﹪呈現(xiàn)細(xì)胞漿或細(xì)胞膜的陽性和(或)強(qiáng)陽性表達(dá),其中.AML的陽性率為54.5﹪,ALL的陽性率為57.1﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).在AL-CR中陽性率為10.0﹪,其

9、中.AML-CR陽性率為5.3﹪,ALL-CR陽性率為27.3﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).初治組與正常對(duì)照組(陽性率為10.5﹪),初治組與AL-CR組之間差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),AL-CR組與對(duì)照組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),且初治AM[,與AML-CR之間、初治ALL與ALL-CR之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).3.Bax在正常人骨髓標(biāo)本中呈微弱表達(dá).在初治AL患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中2

10、9.6﹪呈陽性和(或)強(qiáng)陽性表達(dá),其中AML的陽性率為36.4﹪,.ALL,的陽性率為19.0﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).在.AL-CR中陽性率為40.0﹪,其中.AML-CR陽性率為42.1﹪,ALL-CR陽性率為36.4﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05).初治組與正常對(duì)照組(陽性率為15.8﹪),初治組與ALCR組,AL-CR組與正常對(duì)照組,初治AML,與AML-CR,初治ALL與ALL-CR之間差異均無

11、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)4.根據(jù)陽性細(xì)胞積分分別將BAG-1、Bd-2和Bax分為高表達(dá)組(積分蘭4分)和低表達(dá)組(<4分),分析與臨床特征的關(guān)系:BAG-1、Bd-2及Bax表達(dá)水平與患者年齡、性別、診斷時(shí)外周血白細(xì)胞數(shù)以及髓外浸潤無明顯相關(guān)關(guān)系(P>0.05),但BAG-1高表達(dá)組完全緩解(CR)率低于低表達(dá)組CR率,差異有顯著性(P<0.05);Bel-2高表達(dá)組CR.率低于低表達(dá)組CR率,差異有顯著性(P<0.05);Bax高

12、表達(dá)組CR率高于低表達(dá)組CR率,差異有顯著性(P<0.05).5.相關(guān)性分析顯示BAG-1與Bel-2、Bax分別呈正相關(guān)(r=0.515,P<0.05)和負(fù)相關(guān)(r=0.313,P<0.05)關(guān)系.@2結(jié)論1.BAG-1和Bel-2在初治AML和ALL患者中的表達(dá)均顯著高于正常對(duì)照組以及完全緩解組,且BAG-1高表達(dá)組CR率低于低表達(dá)組,Bel-2高表達(dá)組CR率低于低表達(dá)組,說明BAG-1和Bel-2表達(dá)增高可能不同程度地影響了急性白