左旋多巴制劑生物利用度及遺傳多態(tài)性研究.pdf

1、目前在臨床上，左旋多巴(Levodopa，L-DP)是治療帕金森病(Parkinson's disease，PD)的最有效藥物，它是多巴胺（Dopamine，DA）的前體藥物。它可以通過血腦屏障，并在腦內(nèi)被多巴脫羧酶(Dopa decarboxylase，DDC)脫羧轉(zhuǎn)化成DA而發(fā)揮作用。由于DDC不僅存在于腦中，在其他臟器和血管壁細(xì)胞內(nèi)也廣泛存在，如單用L-DP，僅約1％藥物能進入中樞，故臨床上多采用L-DP合并外周多巴脫羧酶抑制劑(

2、Dopadecarboxylase inhibitor，DDCI)如卡比多巴(Carbidopa，C-DP)或芐絲肼(Benserazide，BSZ)制成復(fù)方制劑，以此提高L-DP進入中樞的量。其中，卡左雙多巴控釋片（商品名:息寧(@)）為目前國內(nèi)較常用的L-DP復(fù)方制劑。
　　口服L-DP后，L-DP吸收迅速，并在體內(nèi)很快被代謝。它主要經(jīng)兩條途徑代謝，一條是經(jīng)DDC脫羧成DA，另一條是經(jīng)兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(Catechol-

3、O-methyltransferase，COMT)代謝成3-氧甲基多巴(3-O-methyldopa，3-OMD)。在合用外周DDCI如C-DP情況下，經(jīng)COMT代謝則成為L-DP主要代謝途徑。但臨床發(fā)現(xiàn)，患者給予L-DP制劑后，血藥濃度隨個體差異波動很大。
　　COMT是體內(nèi)具有生物活性或毒性的兒茶酚胺類結(jié)構(gòu)的化合物的主要代謝酶，如DA和L-DP。它是L-DP代謝途徑中重要的代謝酶，COMT體內(nèi)活性差異對其底物藥物的代謝有重要影

4、響，而L-DP是COMT的底物藥物，所以COMT的基因多態(tài)性可能是L-DP及其代謝物3-OMD產(chǎn)生藥動學(xué)個體差異的一個重要原因。
　　本課題模擬臨床給藥方案，考察了中國男性健康志愿者服用3種L-DP制劑給藥方案達穩(wěn)態(tài)后L-DP的藥動學(xué)特征及生物利用度比較，并考察了COMT基因多態(tài)性與L-DP及其代謝物3-OMD藥動學(xué)的相關(guān)性。
　　在第一章中，建立了同時測定人血漿中L-DP、3-OMD和BSZ或C-DP的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)

5、譜法(LC-MS/MS)，并對方法進行驗證。藥物血漿測定的預(yù)處理方法采用甲醇蛋白沉淀法。色譜條件:色譜柱為YMC PACK MB-ODS（150 mm×2.1 mm，3μm）;柱溫:50℃:流動相:甲醇:0.5％甲酸溶液(30∶70，v/v);流速:0.15 mL/min;質(zhì)譜條件:離子源:電噴霧離子源(ESSI);檢測:正離子檢測;掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測(Multiple reactionmonitoring，MRM);霧化氣流速:10

6、 L/min;氣簾氣流速:10 L/min;碰撞氣流速:4 L/min;噴霧電壓:5000 V;離子源溫度:500℃;采用BSZ或C-DP為內(nèi)標(biāo)(Internal standard，IS)。L-DP、3-OMD、BSZ的血漿濃度均在50～1000 ng/ml（而C-DP在25～1000 ng/ml）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r值均＞0.99）。L-DP、3-OMD、BSZ最低定量濃度(Lower limitof quantification，

7、LLOQ)均為50 ng/mL，C-DP為25 ng/mL。低、中、高三種濃度質(zhì)控樣品的日內(nèi)和日間的RSD均小于11％。日內(nèi)、日間平均準(zhǔn)確度在95.7％～105.2％之間。樣品多次凍融及在室溫下8h，提取后24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。本研究所建立的方法，結(jié)果準(zhǔn)確可重現(xiàn)，可用于L-DP、3-OMD和BSZ或C-DP的藥動學(xué)研究。
　　在第二章中，考察了18名中國男性健康志愿者多次口服三種左旋多巴制劑給藥方案達穩(wěn)態(tài)后血漿中L-DP的藥動學(xué)特

8、征及生物利用度比較。L-DP的主要藥動學(xué)參數(shù)見下表:┏━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━┓┃┃ Test1┃ Test2┃ Reference┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━┫┃ Parameters┃(Sinemet CR0.5 tablet+┃(Madopar0.5 tablet+┃(Sinemet

9、CR0.5 tablet)┃┃┃ entacapone1 tablet)┃entacapone1 tablet)┃┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━┫┃AUC0-t(ng·h/mL)┃3654.6±704.2┃2365.9±597.8┃3156.4±494.51┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━┫┃AU

10、C0-inf(ng·h/mL)┃4522.2±1334.4┃2917.8±656.1┃3787.7±868.7┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━┫┃AUCss(ng·h/mL)┃2810.8±555.7┃1859.7±481.5┃2522.3±372.1┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━┫┃ Cssma

11、x(ng/mL)┃809.6±128.4┃753.6±156.5┃746.8±148.5┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━┫┃Cssmin(ng/mL)┃218.8±58.2┃101.8±33.6┃123.9±39.94┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━┫┃ Tmax(h)┃2.53±0.50┃1.43

12、±0.69┃2.19±0.71┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━┫┃ t1/2(h)┃2.96±1.04┃2.72±1.43┃2.87±1.01┃┣━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━┫┃ DF(％)┃128.8±33.28┃214.0±40.47┃149.4±30.53┃┗━━━━━━━━━━┻━━━━━━

13、━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━┛
　　以L-DP計，經(jīng)90％置信區(qū)間和雙單側(cè)t檢驗，測試藥1:卡左雙多巴控釋片+恩他卡朋片、測試藥2:多巴絲肼片+恩他卡朋片與參比藥卡左雙多巴控釋片的AUC0-t、AUC0-inf、AUCss均生物不等效。L-DP的生物利用度比較結(jié)果為:測試藥1＞參比藥＞測試藥2。測試藥1:卡左雙多巴控釋片+恩他卡朋片、測試藥2:多巴絲肼片+恩他卡朋片與參比藥卡左雙多巴控釋片的Cs

14、smax均生物等效。測試藥1的Tmax與參比藥無顯著差異(P＞0.05)，測試藥2的Tmax與參比藥有顯著差異(P＜0.05)。參比藥的Tmax大于測試藥2。
　　經(jīng)比較三組給藥方案的AUC后，以測試藥1組的給藥方案為最優(yōu)。即卡左雙多巴控釋片+恩他卡朋片，每日四次，每次半片卡左雙多巴控釋片+1片恩他卡朋片;因為從AUC值可看出，卡左雙多巴控釋片+COMT酶抑制劑恩他卡朋后，可明顯提高外周血中L-DP的量（即AUC↑），而L-DP代

15、謝則進一步減少。測試藥1組的給藥方案，在AUC值和Cssmax值上明顯優(yōu)于測試藥2組，藥物濃度的波動(DF％)也明顯較?。ㄇ罢邽?28.8％±33.28％，后者為214.0％±40.47％）。三組給藥方案中的Cssmax均生物等效，說明目前臨床三種給藥方案，使用酶抑制劑并不影響制劑中L-DP的溶出釋放，對ssmax大小沒有影響。在給藥試驗中，志愿者沒有出現(xiàn)有明顯臨床意義的不良事件，受試者均較耐受，提示該三種給藥方案具有較好的臨床安全性和

16、耐受性。
　　在第三章中，采用了直接測序法對以上19名受試者進行COMT G1947A、C1883G和G1966T三個位點的單核苷酸多態(tài)性（Single nucleotide polymorphism，SNP）檢測。考察了COMT G1947A、C1883G和G1966T位點在受試者中的頻率分布，并分析了其中兩個位點(G1947A、C1883G)的基因多態(tài)性對L-DP及其代謝物3-OMD的主要藥動學(xué)參數(shù)（AUC0-∞、Cssmax

17、、 Tmax）及兩者藥動學(xué)參數(shù)比率（AUC0-∞ Ratio、Cssmax Ratio）的影響。本研究發(fā)現(xiàn)，COMT G1947A、C1883G兩個位點基因分布符合哈迪-溫伯格（Hardy-weinberg）平衡定律，樣本具有一定的群體代表性。G1966T位點未發(fā)現(xiàn)基因突變，均為T/T型。
　　通過基因多態(tài)性與藥動學(xué)參數(shù)的相關(guān)性研究，結(jié)果表明:對于COMT C1883G位點，雜合子(C/G)組與野生型(C/C)組及突變純合子(G/

18、G)組在L-DP及3-OMD的AUC0-∞，AUC0-∞Ratio(L-DP/3-OMD)數(shù)據(jù)上均出現(xiàn)顯著性差異，提示從臨床用藥角度而言，COMT基因C/G型攜帶者可能需要減少L-DP制劑的用量，而G/G型攜帶者則可能需要增加L-DP制劑的用量。
　　本課題的研究結(jié)果有助于臨床選擇最優(yōu)的L-DP制劑的給藥方案（卡左雙多巴控釋片半片+恩他卡朋片1片，每日四次），并通過基因多態(tài)性分析，探討臨床個體化給藥的可能，為PD患者合理使用L-D