電化學(xué)免疫傳感器測定牛奶中殘留青霉素的研究.pdf

1、青霉素是一種高效廣譜抗生素類藥物，廣泛應(yīng)用于預(yù)防及治療奶牛疾病。但是，由于大量使用青霉素而造成在牛奶等動物源性食品中的殘留已經(jīng)嚴重影響到人們的身體健康和進出口貿(mào)易。因此，青霉素殘留的檢測已經(jīng)日益引起科學(xué)家的廣泛關(guān)注。生物電化學(xué)傳感器是當(dāng)前電化學(xué)和電分析化學(xué)十分活躍的研究領(lǐng)域，目前已經(jīng)應(yīng)用到生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、分析科學(xué)、材料科學(xué)等許多方面。由于其所特有的檢測快速、靈敏度高、專一性強，簡單經(jīng)濟等優(yōu)點，較之青霉素殘留的傳統(tǒng)檢測方法，更有希望實

2、現(xiàn)該類抗生素殘留的現(xiàn)場檢測。本文研究了用不同修飾方法將青霉素酶或青霉素多克隆抗體固定化，以玻碳電極為基底電極制備了酶傳感器和免疫傳感器，以電流為響應(yīng)信號測定磷酸緩沖溶液和牛奶中的殘留青霉素。具體研究工作如下： 1、研究了電化學(xué)聚合亞甲藍膜在不同酸度條件下氧化還原情況，得到酸催化反應(yīng)活化能Ea與酸度的關(guān)系，Ea隨pH值增大而增大，還原峰電流降低。同時由于聚合亞甲藍膜對H’敏感，利用對青霉素酶催化青霉素水解產(chǎn)生青霉噻唑酸，用電化學(xué)聚

3、合并靜電吸附青霉素酶制成電流型聚合亞甲藍青霉素酶傳感器。采用兩種方法間接測定了青霉素含量：電位在-0.4V時，還原反應(yīng)的計時電流值與青霉素濃度成正比，定量限0.05μg/mL；當(dāng)電位在-0.6～0.6V時，其循環(huán)伏安的還原峰電流值與青霉素濃度成正比，定量限0.1μg/ML；并應(yīng)用到實際牛奶體系中，計時電流法與循環(huán)伏安法的定量限分別0.2和10.4μg/mL。與電位型傳感器相比，電流型傳感器比電位型傳感器檢出限降低，效果更好；與化學(xué)交聯(lián)法

4、電流型傳感器相比，制備方法簡單、重現(xiàn)性高，為牛奶中青霉素檢測提供了一種新方法。μ 2、采用納米二氧化鈦(TiO<,2>)固定辣根過氧化酶(HRP)，研究了HRP在納米TiO<,2>微粒、TiO<,2>納米管修飾的玻碳(GC)電極表面上的直接電子轉(zhuǎn)移行為，結(jié)果表明HRP在TiO<,2>納米管/GC電極表面比在納米TiO<,2>微粒/GC電極更能進行有效和穩(wěn)定的直接電子轉(zhuǎn)移反應(yīng)，且HRP能保持對H<,2>O<,2>還原的生物電催化活性。初步

5、研究HRP標(biāo)記抗體固定在TiO<,2>納米管/GC電極的直接電化學(xué)行為，為抗原抗體免疫反應(yīng)信號的選擇提供了參考依據(jù)。 3、研究了TiO<,2>納米管固定HRP標(biāo)記的青霉素多克隆抗體在玻碳電極上制備青霉素免疫傳感器。所制得的免疫傳感器在磷酸鹽緩沖溶液中表現(xiàn)出直接電化學(xué)行為。然后置于含有青霉素抗原分子的磷酸鹽緩沖溶液中進行培育，HRP標(biāo)記抗體與青霉素免疫結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，利用循環(huán)伏安法測定免疫結(jié)合后的HRP直接電化學(xué)還原峰電流