日本血吸蟲(chóng)抗體的電化學(xué)與化學(xué)發(fā)光免疫傳感器研究.pdf

1、日本血吸蟲(chóng)病是一種能夠給人類造成很大危害的寄生蟲(chóng)病。這種寄生蟲(chóng)病在非洲、亞洲和拉丁美洲的大部分地區(qū)廣泛流行，嚴(yán)重威脅著廣大疫區(qū)人民的生命財(cái)產(chǎn)安全。80年代中期，血吸蟲(chóng)病的防治策略由消滅媒介螺轉(zhuǎn)向以化療為主的綜合性防治，由此血吸蟲(chóng)病的診斷工作顯得愈加重要。近年來(lái)發(fā)展的一些診斷方法學(xué)實(shí)驗(yàn)，如對(duì)流免疫電泳（CIE）、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）、間接熒光免疫實(shí)驗(yàn)（IFIA）、放射免疫測(cè)定（RIA）等已經(jīng)廣泛的用于臨床檢測(cè)。這些方法大多復(fù)雜、

2、耗時(shí)，而且需要昂貴的儀器設(shè)備或者放射性化學(xué)物質(zhì)。所以，開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單、靈敏、和低消耗的日本血吸蟲(chóng)病的檢測(cè)方法依然是重要和必須的。 本論文分別研究了運(yùn)用電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光免疫分析方法來(lái)檢測(cè)日本血吸蟲(chóng)抗體，并將酶催化金屬沉積技術(shù)應(yīng)用到日本血吸蟲(chóng)抗體的電化學(xué)免疫檢測(cè)中。主要研究工作簡(jiǎn)述如下： 第一部分，將酶催化金屬沉積應(yīng)用到日本血吸蟲(chóng)抗體的電化學(xué)檢測(cè)中。將日本血吸蟲(chóng)抗原通過(guò)戊二醛交聯(lián)法固定在電極上，捕獲日本血吸蟲(chóng)抗體，最后接聯(lián)上堿性磷

3、酸酶（AIP）標(biāo)記的二抗形成三明治夾心的模型。在完成以上步驟后，將電極浸泡在底物緩沖液中。在堿性磷酸酶的作用下，非還原性的抗壞血酸2—磷酸（AA—P）轉(zhuǎn)化成抗壞血酸（AA）。溶液中的銀離子在抗壞血酸的作用下，被還原成銀，從而使得銀顆粒沉積在電極表面，再通過(guò)電化學(xué)方法檢測(cè)。在本實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化了電極上抗原固定濃度，以及酶催化金屬沉積的時(shí)間，檢查了傳感器對(duì)人體中其他蛋白質(zhì)的抗干擾能力，取得了良好的效果。掃出峰電流與日本血吸蟲(chóng)抗體稀釋比的對(duì)數(shù)在1：

4、5000～1：100范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。檢測(cè)下限稀釋比為1：6457。通過(guò)對(duì)感染不同天數(shù)的兔血清以及正常兔血清的測(cè)定表明了本方法在日本血吸蟲(chóng)病的臨床檢測(cè)方向有一定的應(yīng)用前景。 第二部分，通過(guò)化學(xué)發(fā)光方法檢測(cè)日本血吸蟲(chóng)抗體濃度。將日本血吸蟲(chóng)抗原通過(guò)N—（3—二甲基氨丙基）—N—乙基碳二亞胺鹽（EDC）和N—羥基琥珀酰亞胺（NHS）固定在磁性納米粒子的表面，用其捕捉日本血吸蟲(chóng)抗體，再與標(biāo)記了辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的二抗聯(lián)結(jié)形成夾心復(fù)

5、合物。分離洗滌后測(cè)量化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度，靈敏的測(cè)定樣品中的日本血吸蟲(chóng)抗體含量。實(shí)驗(yàn)中對(duì)免疫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件（如：日本血吸蟲(chóng)抗原在磁性納米粒子表面的修飾濃度、修飾后磁性納米粒子的用量以及抗原與待測(cè)抗體的反應(yīng)時(shí)間等）進(jìn)行了優(yōu)化。此外，對(duì)人體中其他蛋白質(zhì)的測(cè)定結(jié)果表明：該分析方法的抗干擾性也非常好。發(fā)光強(qiáng)度與感染兔血清的稀釋比在1：10000～1：100的范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系，檢測(cè)下限為1：13442。 第三部分，將辣根過(guò)氧化物酶（HRP

6、）對(duì)H2O2的催化特性應(yīng)用到血吸蟲(chóng)抗體的電化學(xué)免疫檢測(cè)中。實(shí)驗(yàn)通過(guò)夾心法的模式在電極表面固定了日本血吸蟲(chóng)抗原（SjAg）——日本血吸蟲(chóng)抗體（SjAb）——辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記羊抗兔IgG的生物復(fù)合膜。計(jì)時(shí)電流法檢測(cè)HRP酶催化H2O2還原對(duì)苯二酚底物產(chǎn)生的電流變化大小與日本血吸蟲(chóng)抗體（SjAb）濃度在一定范圍內(nèi)成正比。對(duì)免疫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件（如：電極表面固定抗原的濃度、HRP酶標(biāo)二抗的濃度）進(jìn)行了優(yōu)化。此外，考察了其他蛋白質(zhì)對(duì)測(cè)定