不同分化狀態(tài)的人多巴胺能SH-SY5Y細(xì)胞對(duì)狄氏劑作用敏感性的研究.pdf

1、背景：
　　狄氏劑(分子式為C12H8Cl6O)是19世紀(jì)在全世界廣泛應(yīng)用的一種有機(jī)氯類農(nóng)藥,可能通過多種接觸途徑產(chǎn)生神經(jīng)毒性作用。體內(nèi)外研究均提示,多巴胺能系統(tǒng)對(duì)狄氏劑特別敏感。帕金森患者腦組織檢查結(jié)果也提示,狄氏劑和帕金森病很可能存在病因關(guān)系。SH-SY5Y細(xì)胞系來源于兒童成神經(jīng)細(xì)胞瘤,可表達(dá)多種多巴胺能的標(biāo)記物[如酪氨酸羥化酶(TH)、多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(DAT)],常被作為多巴胺能神經(jīng)元模型用來研究帕金森病的發(fā)病機(jī)制。在實(shí)驗(yàn)研究

2、中,常用各種分化因子[如全反式視黃酸(RA)或佛波醇酯(TPA)]來誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞的分化,使其表現(xiàn)出多巴胺能神經(jīng)元特性;也有很多研究直接使用未分化的SH-SY5Y細(xì)胞。目前,有關(guān)未分化和分化的SH-SY5Y細(xì)胞對(duì)神經(jīng)毒物的敏感性尚存在爭(zhēng)議。
　　目的：
　　以SH-SY5Y細(xì)胞作為人多巴胺能神經(jīng)元培養(yǎng)模型,采用RA誘導(dǎo)細(xì)胞分化,觀察并比較狄氏劑對(duì)其在未分化、分化過程中及分化相對(duì)完成三種狀態(tài)下的細(xì)胞毒性;在此基礎(chǔ)上研究

3、狄氏劑對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞分化的影響,以期探討狄氏劑對(duì)神經(jīng)發(fā)育關(guān)鍵環(huán)節(jié)的影響。
　　方法：
　　以人多巴胺能SH-SY5Y細(xì)胞為模型,按1×104個(gè)/孔和5×103個(gè)/孔的密度將細(xì)胞傳至96孔板,用10μM RA分別誘導(dǎo)分化0,4和7天,以1、3、10、30、100μM的狄氏劑對(duì)細(xì)胞染毒24小時(shí),MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率和LIVE/DEAD細(xì)胞活性/細(xì)胞毒性檢測(cè)細(xì)胞死亡率;運(yùn)用考馬斯亮藍(lán)染色法,觀察狄氏劑處理SH-SY5Y細(xì)胞

4、分化中期24h后的細(xì)胞分化率。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以x±s表示。采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析(One Way ANOVA)。進(jìn)一步進(jìn)行組間兩兩比較時(shí),若方差齊時(shí),采用SNK檢驗(yàn)(Student-Newman-Keuls法);若方差不齊時(shí),采用Games-Howell檢驗(yàn)。率間的比較采用χ2檢驗(yàn)。各因素相關(guān)性分析采用非參數(shù)Spearman相關(guān)分析。以P<0.05為差異有

5、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　MTT試驗(yàn)結(jié)果顯示,狄氏劑可引起SH-SY5Y細(xì)胞存活率呈劑量依賴性下降(均P<0.01),分化中(4d)的細(xì)胞與未分化(0d)和完成分化(7d)的細(xì)胞相比,存活率在較低劑量(3μM)就有明顯下降(P<0.05)。LIVE/DEAD染色結(jié)果顯示,狄氏劑可引起SH-SY5Y細(xì)胞死亡率呈劑量依賴性增高(均P<0.05),分化中(4d)的細(xì)胞與未分化(0d)和完成分化(7d)的細(xì)胞相比,死亡率在較低劑

6、量(3μM)也有明顯增高(P<0.05);分化的細(xì)胞較未分化的細(xì)胞死亡率更高(P<0.05),而分化中(4d)的細(xì)胞在100μM劑量時(shí)又比完成分化(7d)的細(xì)胞死亡率更高
　　(P<0.05)。考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果顯示,狄氏劑在3μM的劑量下可以明顯的影響分化中(4 d)SH-SY5Y細(xì)胞的分化(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　分化中的人多巴胺能SH-SY5Y細(xì)胞對(duì)狄氏劑毒作用最敏感;對(duì)分化中細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒性的狄氏劑劑