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文檔簡介
1、目的:鉛是環(huán)境中廣泛存在的一種有毒的重金屬,對人體有很嚴(yán)重的毒副作用。長期鉛暴露對機(jī)體多個系統(tǒng)均有不良影響,其中危害最為嚴(yán)重的就是鉛的神經(jīng)毒性。血紅素加氧酶-1(Heme oxygenase,HO-1)在機(jī)體對抗外界環(huán)境因素刺激作用產(chǎn)生的一系列應(yīng)激防御中起著重要作用。研究表明,HO-1的誘導(dǎo)表達(dá)對某些外來化合物的毒性具有一定的細(xì)胞保護(hù)作用,但HO-1的誘導(dǎo)表達(dá)能否對鉛所致神經(jīng)毒性具有良性作用仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過鈷原卟啉(CoPP)誘導(dǎo)S
2、H-SY5Y細(xì)胞內(nèi)HO-1過表達(dá),研究HO-1對鉛所致SH-SY5Y細(xì)胞毒性作用及相關(guān)的機(jī)制。
方法:用不同劑量的CoPP溶液(1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)誘導(dǎo)HO-1在SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)表達(dá),確定適宜的CoPP預(yù)處理濃度;然后用CoPP預(yù)處理細(xì)胞24h,隨后對細(xì)胞進(jìn)行醋酸鉛染毒。采用CCK-8法檢測細(xì)胞活性,內(nèi)源性CO水平用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定,用2’,7’-二氯
3、熒光黃雙乙酸鹽熒光探針檢測細(xì)胞染毒6h后活性氧含量;用JC-10檢測線粒體膜電位;用Hoechst染色測細(xì)胞凋亡;熒光檢測Caspase-3/7活性;用western blot法檢測凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。
結(jié)果:與對照組相比,CoPP處理使HO-1表達(dá)升高,并呈現(xiàn)出劑量依賴性,結(jié)果顯示5μmol/L CoPP作為預(yù)處理細(xì)胞的濃度較為適宜;CCK-8實(shí)驗(yàn)表明,與鉛染毒組相比較,CoPP預(yù)處理的醋酸鉛染毒組細(xì)胞存活率升高;ELISA
4、方法測定內(nèi)源性CO表明PbAc染毒降低內(nèi)源性CO的含量(P<0.05),CoPP預(yù)處理的PbAc染毒組內(nèi)源性CO的含量與PbAc染毒組相比明顯增加(P<0.05);醋酸鉛顯著增加SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)ROS含量(P<0.05),CoPP預(yù)處理的醋酸鉛染毒組細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯降低(P<0.05);JC-10熒光探針檢測線粒體膜電位顯示,PbAc染毒使細(xì)胞線粒體膜電位明顯降低(P<0.05),CoPP預(yù)處理的PbAc染毒組膜電位與單純?nèi)径窘M
5、相比有明顯升高(P<0.05);Hoechst染色顯示,PbAc導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的凋亡增加(P<0.05),CoPP預(yù)處理的醋酸鉛染毒組細(xì)胞凋亡率明顯降低(P<0.05);熒光測Caspase-3/7活性顯示,醋酸鉛導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)Caspase-3/7活性增加(P<0.05),CoPP預(yù)處理的醋酸鉛染毒組細(xì)胞內(nèi)Caspase-3/7活性明顯降低(P<0.05);western blot結(jié)果顯示,鉛染毒致使細(xì)胞內(nèi)Bax蛋白表達(dá)水平升
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