白念珠菌雙形態(tài)性的影響因素的研究.pdf

1、目的： 探討白念珠菌雙形態(tài)性形成的相關(guān)影響因素，尋找控制茵絲形成的關(guān)鍵基因。 方法： 1、分離培養(yǎng)八株不同來(lái)源的白念珠菌(標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床標(biāo)本分離菌株)，控制白念珠菌菌絲生長(zhǎng)的影響因素，包括孢子濃度、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基成分和pH值，觀察菌絲的生長(zhǎng)特點(diǎn)和形成率的變化。 2、分別采用-80℃研磨、液氮研磨、酸洗玻璃珠三種破壁方法破壁，用TRIzol試劑提取白念珠菌菌絲相和酵母相的總RNA，對(duì)提取的RNA進(jìn)行定性定

2、量及完整性分析。 3、通過(guò)設(shè)置內(nèi)參的半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法測(cè)定白念珠菌雙形態(tài)性的四個(gè)相關(guān)調(diào)控基因EFGl、HWPl、HYRl、HGCl的mRNA在菌絲相和酵母相中的表達(dá)差異。 4、將八株白念珠菌分別接種在顯色培養(yǎng)基和玉米吐溫培養(yǎng)基上，用NB-UVB臨床照射劑量(0.4-3.0J/cm<;2>)對(duì)其進(jìn)行3次/天，共7天的照射，觀察菌絲和酵母的生長(zhǎng)及形態(tài)變化。 結(jié)果： l、菌絲具有聚集

3、生長(zhǎng)成絮狀物的特點(diǎn)。在pH=5.0時(shí)，菌絲上的孢子易脫落；在pH=9.0時(shí)，易形成較大分生孢子；中性pH值最有利于純菌絲的生長(zhǎng)。孢子濃度5×10<'6>/ml，在含10％胎牛血清pH7.0的PRMll640培養(yǎng)基中，38℃靜置培養(yǎng)4到8小時(shí)，菌絲的形成效果好。菌絲純度大于95％。 2、三種破壁方法提取白念珠菌酵母相RNA的濃度(±s，ug/ul)分別為：-80℃研磨法(0.464±0.101，ug/u1)、酸洗玻璃珠法(

4、0.911±0.413，ug/ul)、液氮研磨法(1.418±0.524，ug/t11)。而且后兩者RNA的完整性比前者好。 3、HWPl和HGCl基因在菌絲相有表達(dá)，而在酵母相無(wú)表達(dá)。EFGl和HYRl基因在菌絲相和酵母相的表達(dá)沒(méi)有明顯差異。 4、隨著UVB照射劑量的增加，菌絲形成逐漸減少，菌絲上生長(zhǎng)的分生孢子逐漸增多。照射劑量超過(guò)1.5J/cm<'2>念珠菌的生長(zhǎng)受到明顯抑制。 結(jié)論： 1、血清、中性