山蒼子油對小鼠白念珠菌陰道炎影響的實驗研究.pdf

1、目的： 本研究通過構建白念珠菌陰道炎小鼠模型，觀察山蒼子油對白念珠菌陰道炎是否具有治療及止癢作用，并篩選出可以外用治療白念珠菌陰道炎的山蒼子油的濃度，為山蒼子油的臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法： 1 白念珠菌陰道炎動物模型的構建：6周齡清潔級雌性昆明小鼠10只。于接種前6天開始隔日皮下注射1mg/ml苯甲酸雌二醇油劑0.1ml，使之處于假發(fā)情狀態(tài)，直至實驗結束。在接種日，將密度為2.5×10<'6>cfu/ml的菌

2、懸液20μl(即白念珠菌孢子接種量為5×10<'4>cfu)，灌注入所有小鼠陰道內。接種菌后的第2、第4天分別處死5只小鼠取陰道組織送組織病理學檢查。小鼠處死前均用拭子取樣涂片真菌鏡檢。 2 山蒼子油對小鼠陰道黏膜的刺激實驗：6周齡清潔級雌性昆明小鼠50只，隨機分成5組，即Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組，每組10只。Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組、Ⅴ組分別給予4％、8％、12％、16％山蒼子油，Ⅰ組給予相同劑量生理鹽水。每天陰道內給藥1次，每次

3、3μl，連續(xù)7天。給藥7天內觀察小鼠的飲食、活動、精神狀態(tài)、糞便等。末次給藥24小時后，處死動物，取陰道組織送組織病理學檢查。 3 山蒼子油對白念珠菌陰道炎小鼠模型的治療作用實驗：將造模成功的45只小鼠，隨機分為5組，即A組、B組、C組、D組、E組，每組9只。B組、C組、D組每日分別陰道內給予4％、8％、12％山蒼子油1次，每次30μl，連續(xù)7天，A組給予同等劑量生理鹽水，E組給予同等劑量氟康唑溶液。分別于治療0天、5天、7天及

4、21天后，用5μlPBS液灌洗陰道8～10次。陰道灌洗液充分混勻后，進行10倍系列稀釋。用20μl微量加樣器滴種于改良沙堡培養(yǎng)基平皿上，自高稀釋度滴種，每個稀釋度滴種3滴。37℃培養(yǎng)48小時，計數(shù)菌落形成單位(CFU)。 4止癢實驗：清潔級健康豚鼠30只。實驗前先將豚鼠右后足背剪毛，次日用粗砂紙擦傷右后足背去毛處，面積約1cm<'2>，隨機分為5組，即甲組、乙組、丙組、丁組、戊組，每組6只。乙組、丙組、丁組用藥分別為4％、8％、12％山

5、蒼子油1ml/只，甲組給予相同劑量生理鹽水，戊組給予丁酸氫化可的松乳膏0.05g/只，局部用藥30分鐘后，用0.05％磷酸組織胺5μl涂抹擦傷皮膚，3分鐘內若豚鼠不出現(xiàn)舔擦傷皮膚動作，重復操作，直至出現(xiàn)豚鼠回頭舔后足為止。以最后出現(xiàn)豚鼠回頭舔后足時所給予的磷酸組織胺總量為致癢閾，記錄涂抹磷酸組織胺的次數(shù)及用量。 應用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標準差表示。陰道灌洗液載菌量及磷酸組織胺致癢閾結果采用單因素方差

6、分析(Oneway Anova)進行數(shù)據(jù)處理，P<0.05作為顯著性界限。 結果： 1 白念珠菌陰道炎動物模型的構建：造模后第2天，涂片真菌鏡檢可見大量孢子和陰道上皮細胞。組織病理切片中陰道壁黏膜淺層可見大量孢子。第4天，涂片真菌鏡檢可見較多假菌絲和芽生孢子，大量陰道上皮細胞。組織病理切片陰道壁黏膜淺層中可見大量假菌絲和孢子。 2 山蒼子油對小鼠陰道黏膜刺激實驗：給藥7天內，各濃度山蒼子油組小鼠的飲食、活動、精神狀態(tài)、糞

7、便等均正常，無死亡現(xiàn)象，與生理鹽水組無明顯差異。組織病理學檢查結果：Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組4組小鼠陰道黏膜表皮層次清楚，均可見單層排列的柱狀基底細胞；黏膜下血管未見明顯擴張、充血；結締組織輕度水腫；真皮內少量炎細胞浸潤。Ⅴ組小鼠陰道黏膜表皮細胞內水腫，棘層細胞明顯空泡樣變性，基底細胞液化變性；黏膜下血管明顯擴張、充血；結締組織水腫；真皮內較多炎細胞浸潤。表明4％山蒼子油、8％山蒼子油、12％山蒼子油刺激性小，可以用于外用治療白念珠菌陰道

8、炎小鼠模型的實驗研究；16％山蒼子油對小鼠陰道黏膜有明顯的刺激作用，不宜用于治療小鼠白念珠菌陰道炎。 3 山蒼子油對白念珠菌陰道炎小鼠模型的治療作用：用藥7天后，A組、B組、C組、D組及E組小鼠陰道灌洗液菌落計數(shù)分別為7.42±0.28、6.94±0.40、6.52±0.42、6.11±0.27、5.31±0.48。各個濃度山蒼子油均能降低陰道灌洗液菌落計數(shù)，與生理鹽水組比較有顯著性差異(P<0.05)。隨著山蒼子油治療濃度的增

9、高，菌落計數(shù)逐漸下降，且差異有顯著性(P<0.05)。 4止癢實驗：各個濃度山蒼子油均能提高豚鼠對磷酸組織胺的致癢閾，與生理鹽水組比較有顯著性差異(P<0.05)。不同濃度的山蒼子油對磷酸組織胺致癢反應的致癢閾隨藥物濃度的增加而明顯提高，且差異有顯著性(P<0.05)。 結論： 1 4％山蒼子油、8％山蒼子油及12％山蒼子油刺激性小，均可用于治療白念珠菌陰道炎。 2 山蒼子油外用對白念珠菌陰道炎具有一定的