組織工程膠原載體的制備及相關(guān)研究.pdf

1、創(chuàng)傷、腫瘤、感染等原因?qū)е鹿钦垡约肮侨睋p發(fā)生率不斷增高，常常需要修復(fù)重建。尤其是骨缺損的治療一直是骨科面臨的一個(gè)難題。骨缺損的主要治療方法如自體骨移植、同種異體骨移植、異種骨移植等都存在一定的缺陷。隨著組織工程的發(fā)展，人工骨移植修復(fù)骨缺損顯示出了更多的優(yōu)點(diǎn)。膠原是骨的主要成分之一，具有諸多性能：在成熟組織中起結(jié)構(gòu)作用，對發(fā)育中組織起定向作用；具有高張力、低延展性、纖維定向性、可控制的交聯(lián)度；極好的生物相容性、弱甚至無抗原性、植入體內(nèi)無排

2、異反應(yīng)、細(xì)胞親和力高、可刺激細(xì)胞增殖、分化；體內(nèi)可降解且可調(diào)控降解的速度，降解產(chǎn)物為氨基酸或小肽，可作為組建細(xì)胞的原料或通過新陳代謝排出。根據(jù)組織工程研究的需要，本研究擬從多種生物原料中制備新型膠原產(chǎn)品。
　　1．從四種生物原料中制備高純度膠原
　　[目的]從4種生物原料中制備高純度Ⅰ型膠原，滿足骨組織工程應(yīng)用的需要。
　　[方法]分別以牛皮質(zhì)骨、牛跟腱、豬跟腱和豬皮為原料，采用酸性條件下胃蛋白酶限制性酶解法經(jīng)過粉碎、

3、脫鈣、脫脂、抽提、鹽析，復(fù)溶透析等步驟提取膠原，計(jì)算提取率。
　　[結(jié)果]從四種生物原料中經(jīng)過上述步驟均可以獲得Ⅰ型膠原，超過常規(guī)方法。
　　[結(jié)論]限制性酶解法可以從四種生物原料中獲得較高產(chǎn)量的膠原產(chǎn)品，具有良好的應(yīng)用前景。
　　2．生物源性膠原成分分析與鑒定
　　[目的]對從4種生物原料中制備的Ⅰ型膠原進(jìn)行成分分析與鑒定，并與Sigma公司產(chǎn)品進(jìn)行對比。
　　[方法]采用酸性條件下胃蛋白酶限制性酶解法從

4、牛皮質(zhì)骨、牛跟腱、豬跟腱和豬皮中提取的Ⅰ型膠原用紫外吸光度、氨基酸分析、SDS-PAGE電泳進(jìn)行鑒定，計(jì)算純度，同時(shí)與Sigma公司產(chǎn)品進(jìn)行比較。
　　[結(jié)果]本法所提膠原的最大紫外光吸收波長為230nm，氨基酸分析、電泳鑒定符合Ⅰ型膠原特征。牛皮質(zhì)骨所提膠原純度最高（96.12％），優(yōu)于Sigma公司產(chǎn)品。
　　[結(jié)論]通過限制性酶解法可以從4種生物原料中制備高純度Ⅰ型膠原產(chǎn)品，其中以牛皮質(zhì)骨膠原最好。
　　3．組織

5、工程膠原支架生物特性研究
　　[目的]對提取的高純度骨膠原作為組織工程支架應(yīng)用進(jìn)行細(xì)胞相容性和生物降解性的研究。
　　[方法]用提取并經(jīng)鑒定的高純度Ⅰ型骨膠原包被玻片同時(shí)與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)，觀察細(xì)胞粘附率、細(xì)胞毒性，并繪制細(xì)胞增殖曲線。同時(shí)用高純度Ⅰ型骨膠原制備支架，經(jīng)過京尼平交聯(lián)后植入小鼠體內(nèi)觀察生物降解性。
　　[結(jié)果]高純度Ⅰ型骨膠原細(xì)胞粘附率高、無細(xì)胞毒性、能促進(jìn)細(xì)胞增殖，經(jīng)過京尼平交聯(lián)的膠原支架植入小鼠體內(nèi)