鋅-金屬硫蛋白對(duì)深Ⅱ度燙傷大鼠創(chuàng)面愈合影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景： 臨床上燒(燙)傷以中小面積、II度為絕大多數(shù)。II度燒(燙)傷創(chuàng)面的轉(zhuǎn)歸，與早期創(chuàng)面局部微循環(huán)和后期創(chuàng)面微血管生成密切相關(guān)。早期創(chuàng)面的深度處于動(dòng)態(tài)變化過(guò)程之中，因?yàn)榫植咳毖毖鹾瓦^(guò)度炎癥反應(yīng)，一般創(chuàng)面都會(huì)逐漸加深。燒(燙)傷后引起氧化應(yīng)激，過(guò)量的氧自由基致使創(chuàng)面修復(fù)細(xì)胞的遷移、增殖能力下降，細(xì)胞外基質(zhì)合成障礙，并通過(guò)破壞角化的上皮細(xì)胞和管腔的滲透性以及膠原的代謝阻礙創(chuàng)面愈合進(jìn)程。因此，有針對(duì)性的尋求通過(guò)對(duì)抗深I(lǐng)I度燒(燙

2、)傷創(chuàng)面氧化應(yīng)激反應(yīng)、改善創(chuàng)面局部微循環(huán)、減輕過(guò)度炎癥反應(yīng)，以促進(jìn)燒(燙)傷創(chuàng)面愈合的藥物，將為燒(燙)傷創(chuàng)面提供新的治療手段和護(hù)理思路。鋅，金屬硫蛋白(Zn-metallothionein，Zn-MT)系一種低分子量含多巰基與二價(jià)金屬、鰲合7個(gè)鋅離子的非酶蛋白，一系列研究表明，Zn-MT具有較強(qiáng)的清除氧自由基，抗脂質(zhì)過(guò)氧化的作用，而且在創(chuàng)面愈合過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其可與一些細(xì)胞因子相互作用共同調(diào)節(jié)傷口愈合過(guò)程。但目前國(guó)內(nèi)外的研究?jī)H涉及Zn-MT

3、對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物燙傷創(chuàng)面下組織耗氧量、琥珀酸脫氫酶活性的影響，對(duì)Zn-MT是否可以抑制燒(燙)傷創(chuàng)面氧化應(yīng)激反應(yīng)、改善創(chuàng)面微循環(huán)，防止血栓形成，并阻止早期燒(燙)傷創(chuàng)面向深部發(fā)展，促進(jìn)并加快創(chuàng)面愈合尚無(wú)研究。 目的： 本研究通過(guò)建立深I(lǐng)I度燙傷大鼠模型，觀察Zn-MT對(duì)深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面氧化應(yīng)激反應(yīng)的抑制作用，并觀察其對(duì)創(chuàng)面微循環(huán)的影響，探討Zn-MT在深I(lǐng)I度燒(燙)傷創(chuàng)面愈合中的作用，從抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)的角度探討其促進(jìn)創(chuàng)面愈合

4、的可能作用機(jī)制，為燒(燙)傷創(chuàng)面治療提供新的策略和護(hù)理思路。 材料和方法： 1.將健康雄性Wistar大鼠78只隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(Zn-MT組)、對(duì)照組(生理鹽水組)和正常對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各36只，正常對(duì)照組6只。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均建立深I(lǐng)I度燙傷大鼠模型，傷后即刻給藥，二組分別外敷單層紗布浸潤(rùn)的濃度為1×10-5mol/L的Zn-MT以及等滲鹽水，第一天每4h換藥1次，第2天和第3天每8h換藥1次，此后每日換藥1次，

5、直至創(chuàng)面愈合。 2.分別在傷后12h、24h、48h及7d、14d、21d，6個(gè)時(shí)相點(diǎn)觀察創(chuàng)面愈合面積、創(chuàng)面愈合率，蘇木精.伊紅染色觀察創(chuàng)面愈合情況，免疫組織化學(xué)染色計(jì)算創(chuàng)面微血管密度(nucrovessel density， MVD)以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)含量，黃嘌呤氧化還原酶法測(cè)定創(chuàng)面組織超氧化物歧化酶(superoxidediamutase，SO

6、D)活性，硫代巴比妥酸法測(cè)定創(chuàng)面組織丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量，氯胺T法測(cè)定創(chuàng)面組織羥脯氨酸(hydroxyproline，HYP)含量及免疫染色法測(cè)定創(chuàng)面組織I型和III膠原含量。 結(jié)果： 1.各組大鼠創(chuàng)面愈合面積百分比：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩組的創(chuàng)面愈合率隨時(shí)間推移均表現(xiàn)出上升趨勢(shì)，在傷后7d，14d，18d，21d實(shí)驗(yàn)組的創(chuàng)面愈合率均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。 2.在傷后7d、14d、

7、21d三個(gè)時(shí)相點(diǎn)，兩組的創(chuàng)面MVD隨時(shí)間推移均表現(xiàn)出上升趨勢(shì)，相對(duì)三個(gè)時(shí)相點(diǎn)而言均有非常顯著的升高(P<0.Ol)，而且實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。 3.在傷后12h，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩組的創(chuàng)面VEGF含量與正常對(duì)照組相比未顯示出顯著差異(P>0.05)。在傷后24h、48h、7d、14d兩組含量均逐漸增加，除對(duì)照組在24h時(shí)與正常對(duì)照組相比沒(méi)有顯著差異外(P>0.05)，其余均顯示顯著升高(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)組在上述

8、四個(gè)時(shí)相點(diǎn)均顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。在傷后21d，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均有所下降，但與正常對(duì)照組相比仍存在顯著差異(P<0.01)，且兩組間存在顯著差異(P<0.05)。 4.在傷后12h、24h、48h、7d、14d，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩組的創(chuàng)面組織SOD活性均較正常對(duì)照組顯示出顯著降低(P<0.01)，且兩組之間也存在顯著差異(P<0.05)。在傷后21d，對(duì)照組活性與正常對(duì)照組相比仍存在顯著差異(P<0.01)，而實(shí)驗(yàn)組與其

9、相比已無(wú)顯著差異(P>0.05)。從均值來(lái)看，兩組隨著時(shí)間的推移均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，對(duì)照組上升趨勢(shì)較緩，實(shí)驗(yàn)組上升較快。 5.在傷后12h，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組兩組的創(chuàng)面組織MDA含量與正常對(duì)照組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在傷后24h、48h，兩組與正常對(duì)照組相比均明顯升高(P<0.01)，但實(shí)驗(yàn)組升高程度小于對(duì)照組(P<0.05)。在傷后7d，兩組均降低，但實(shí)驗(yàn)組降低程度明顯大于對(duì)照組(P<0.05)，且對(duì)照組與jF常對(duì)照組相

10、比有顯著差異(P<0.05)。在傷后14d、21d，兩組均下降，與正常對(duì)照組相比沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。 6.在傷后48h、7d，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的創(chuàng)面組織HYP含量均顯著升高，與正常對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.01)，且實(shí)驗(yàn)組均顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。在傷后14d，實(shí)驗(yàn)組仍顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，但與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。在傷后21d，實(shí)驗(yàn)組顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)，而

11、對(duì)照組與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 7.實(shí)驗(yàn)組I、III型膠原在傷后不同時(shí)間其免疫組化染色灰度百分比均高于對(duì)照組(P<0.01)，其中I型膠原變化特點(diǎn)為隨傷后時(shí)間表達(dá)量逐漸升高，而III型膠原在傷后早期即有明顯的合成，隨著傷口逐漸愈合，其表達(dá)量逐漸下降。 結(jié)論： 1.鋅-金屬硫蛋白能明顯縮短創(chuàng)面上皮化的時(shí)間，通過(guò)改善毛細(xì)血管血運(yùn)，有效地改善燒(燙)傷創(chuàng)面微循環(huán)，并促進(jìn)創(chuàng)面微血管的形成，從而加快創(chuàng)

12、面愈合。 2.鋅-金屬硫蛋白可增加大鼠深I(lǐng)I度燙傷創(chuàng)面組織血管內(nèi)皮因子的合成和釋放，從而通過(guò)調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移、增加微血管的通透性促進(jìn)創(chuàng)面愈合。 3.鋅-金屬硫蛋白可通過(guò)減少創(chuàng)面對(duì)超氧化物歧化酶的消耗，減少丙二醛的產(chǎn)生來(lái)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，保護(hù)膜脂質(zhì)與膜蛋白，其能夠清除脂質(zhì)過(guò)氧化物代謝物和自由基是抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)的機(jī)制之一。 4.鋅-金屬硫蛋白可以釋放鋅離子予創(chuàng)面，通過(guò)金屬硫蛋白對(duì)鋅的代謝調(diào)控達(dá)到創(chuàng)面補(bǔ)鋅