膽汁淤積性肝纖維化時(shí)的病理改變及FoxL1在肝組織中的表達(dá)和意義初探.pdf

1、肝纖維化是肝臟對各種原因所致肝損傷的創(chuàng)傷愈合反應(yīng)，表現(xiàn)為肝內(nèi)膠原纖維異常增生，肝細(xì)胞變性壞死，肝組織結(jié)構(gòu)和功能遭到破壞。臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都已證明，肝纖維化是慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)途徑。因此探討肝纖維化時(shí)的病理改變對深入研究肝纖維化的形成機(jī)制具有重要意義。 用于肝纖維化研究的動(dòng)物模型有：中毒性肝損傷模型、膽汁性肝損傷模型、免疫性肝損傷性肝纖維化模型等，而本研究則選用小鼠膽總管結(jié)扎致肝纖維化的動(dòng)物模型。該模型因具有操作簡單、穩(wěn)

2、定可靠等特點(diǎn)，成為研究中非常常用的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀Ｔ谛∈篌w內(nèi)行膽總管結(jié)扎術(shù)后，可引起膽汁肝內(nèi)淤積。當(dāng)肝細(xì)胞受到刺激后，趨化因子和細(xì)胞因子釋放、中性粒細(xì)胞等募集到肝臟，進(jìn)而出現(xiàn)肝細(xì)胞凋亡、壞死、肝性炎癥，細(xì)胞增殖等一系列相關(guān)反應(yīng)。 在本課題中，我們通過膽總管結(jié)扎手術(shù)成功建立并評價(jià)了小鼠膽汁淤積性肝纖維化模型，并以此為體內(nèi)模型研究肝纖維化形成過程中的病理改變，本實(shí)驗(yàn)選用與炎癥相關(guān)的KC-1、MIP-2、ICAM-1和MPO作為評價(jià)肝性炎癥

3、浸潤的指標(biāo)，用與增殖相關(guān)的抗原PCNA、Ki-67和CK-19作為評價(jià)細(xì)胞增殖的指標(biāo)，用TUNEL染色和病理切片作為評價(jià)凋亡和壞死的指標(biāo)，研究膽汁淤積性肝纖維化形成中肝性炎癥、細(xì)胞增殖、凋亡和壞死情況。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：膽總管結(jié)扎后，隨著趨化因子和細(xì)胞因子的升高，炎癥細(xì)胞浸潤，導(dǎo)致肝損傷。與假手術(shù)組相比，模型組肝性炎癥、細(xì)胞增殖、凋亡和壞死均顯著增加。提示肝纖維化的形成是多因素、多環(huán)節(jié)相互作用和調(diào)控的結(jié)果，但其確切機(jī)制尚未完全闡明。

4、 Fox(forkhead/winged helix transcription factor)基因家族是2000年才統(tǒng)一命名的功能多樣的“翼螺旋”轉(zhuǎn)錄因子，該家族成員具有一個(gè)高度保守的Forkhead結(jié)構(gòu)域，具有DNA結(jié)合、轉(zhuǎn)錄活化和轉(zhuǎn)錄抑制等功能。已有研究結(jié)果表明肝星形細(xì)胞(hepatic stellate cell，HSC)激活是肝纖維化發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而TGF-β1/Smads信號(hào)通路是調(diào)控HSC活化的主要通路。FoxC1調(diào)

5、控的部分靶基因有Smad2、BMP-7、TGF-β1等，提示FoxC1參與了TGF-β1信號(hào)通路。FoxL1是表達(dá)于胃腸道間葉細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子，其Forkhead區(qū)域與FoxC1在核苷酸水平的同源性高達(dá)83％，由此提示：FoxL1可能通過參與TGF-β1/Smads信號(hào)通路，在調(diào)控肝纖維化形成過程中發(fā)揮重要作用。 在課題中我們采用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、免疫組織化學(xué)染色技術(shù)以及Western blotting技術(shù)