膽汁淤積時(shí)肝組織線(xiàn)粒體功能改變及mtDNA損傷的臨床分析.pdf

1、線(xiàn)粒體是提供和存儲(chǔ)能量的重要場(chǎng)所，是細(xì)胞生命活動(dòng)的動(dòng)力站。線(xiàn)粒體DNA（mitochondriAlDNA，mtDNA）是核外唯一具有遺傳效應(yīng)的物質(zhì)，具有自我復(fù)制功能并控制著一定的遺傳性狀。線(xiàn)粒體損傷可引起一系列的細(xì)胞功能障礙，線(xiàn)粒體的功能改變及基因組的突變?nèi)笔c疾病進(jìn)程有著密切的關(guān)系。梗阻性黃疸（obstructivejaundice，OJ）是臨床上常見(jiàn)的疾病，多由結(jié)石和腫瘤引起，常常需要采用外科治療。
　　 膽汁淤積時(shí)，氧自由

2、基通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化作用于線(xiàn)粒體蛋白、膜脂及mtDNA 而出現(xiàn)ATP酶活性降低，脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物蓄積，mtDNA 堿基序列改變（缺失及突變），拷貝數(shù)減少，最終引起能量代謝障礙而促進(jìn)肝細(xì)胞死亡。故而線(xiàn)粒體作為膽汁淤積時(shí)肝細(xì)胞內(nèi)最先受損害的細(xì)胞器，以及影響線(xiàn)粒體功能的最基本因素-mtDNA 由于缺乏有效的保護(hù)和修復(fù)能力等因素而易遭損害，線(xiàn)粒體功能便成了決定肝細(xì)胞功能的重要因素。所以我們通過(guò)對(duì)mtDNA 缺失損傷的初步臨床分析及線(xiàn)粒體的功能改變的研

3、究，為進(jìn)一步揭示mtDNA 缺失致肝功能改變提供新的思路，這不僅有助于我們更加深刻的理解和完善膽汁淤積的損傷機(jī)制，而且為重度梗阻性膽汁淤積的早期治療和預(yù)后評(píng)估開(kāi)辟新的途徑。
　　 目的：（1）通過(guò)對(duì)mtDNA 缺失及突變的臨床分析，并結(jié)合前期自然基金的研究結(jié)論，初步判定mtDNA在梗阻性黃疸患者肝組織中的損傷情況，為探討mtDNA 損傷致膽汁淤積性肝損害提供新的思路。（2）通過(guò)對(duì)膽道梗阻不同時(shí)間點(diǎn)肝線(xiàn)粒體功能學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)，以探討

4、線(xiàn)粒體功能損害與基因缺失的相關(guān)情況。
　　 方法：（1）嚴(yán)格按照入組條件隨機(jī)選取好對(duì)照組和病例組，利用17對(duì)相互錯(cuò)配重疊的引物進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，并結(jié)合基因測(cè)序?qū)Ｗ栊渣S疸患者肝細(xì)胞mtDNA的缺失及突變情況進(jìn)行初步定位。（2）制備梗阻性黃疸大鼠模型，設(shè)立對(duì)照組、SHAM組和BDL組，利用Elisa 檢測(cè)線(xiàn)粒體ATP 酶及脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA的改變情況。
　　 結(jié)果：（1）通過(guò)多對(duì)引物擴(kuò)增并結(jié)合測(cè)序結(jié)果分析，梗阻性黃疸患者

5、部分肝細(xì)胞mtDNA分別出現(xiàn)堿基位置8429～9591處約1.1kb的缺失，16024～60處約0.6kb的缺失，1889～3031處約1.1kb的多片段缺失以及D-loop 區(qū)部分堿基的高突變率；同時(shí)部分細(xì)胞mtDNA在8470～8482bp和13447～13459bp 之間出現(xiàn)了4977bp 片段的共同缺失。（2）隨著梗阻時(shí)間延長(zhǎng)，較之對(duì)照組而言，BDL組MDA在肝臟線(xiàn)粒體內(nèi)逐漸潴留（p<0.05），于14d時(shí)出現(xiàn)不可逆改變（p<0

6、.05）；而ATP 酶活性逐漸降低（p<0.05），于14d時(shí)降至最低（p<0.05），但在梗阻早期（1-3d），ATP 酶活性下降不明顯（p>0.05）。
　　 結(jié)論：膽道梗阻時(shí)，由于膽汁排出受阻，組織缺血缺氧，過(guò)氧化作用增強(qiáng)而生成的大量氧自由基。后者通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化作用對(duì)線(xiàn)粒體膜脂、膜蛋白及mtDNA造成損傷，表現(xiàn)為：MDA在線(xiàn)粒體內(nèi)蓄積，Na+-K+-ATP酶活性降低，線(xiàn)粒體功能受到損害；除此之外，肝細(xì)胞線(xiàn)粒體基因組由于缺乏

7、有效的組蛋白保護(hù)以及缺乏對(duì)氧自由基的有效清除能力而易受損，部分細(xì)胞mtDNA出現(xiàn)了多片段缺失及部分堿基的突變。這與前一國(guó)家自然基金的動(dòng)物研究結(jié)果基本相仿。因而我們認(rèn)為：膽汁淤積時(shí)，MDA的潴留對(duì)mtDNA的損傷起到積極的作用，是造成肝細(xì)胞線(xiàn)粒體功能以及肝功能受損的重要因素。因而積極有效地清除MDA及保護(hù)mtDNA的功能性和完整性也將成為今后研究的重點(diǎn)，這也為研究梗阻性黃疸肝功能的損傷機(jī)制及保護(hù)手段提供了新的思路，為臨床上保護(hù)及改善梗阻性