噴霧干燥法制備噬菌體展示的1型糖尿病微球疫苗.pdf

1、疫苗對(duì)乙型肝炎、艾滋病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、癌癥及其他感染性疾病的防治和治療發(fā)揮著重要的作用，預(yù)防和治療傳染性疾病及人類(lèi)非傳染性重大疾病最有效的方法是接種疫苗。疫苗包括預(yù)防性疫苗和治療性疫苗，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，未來(lái)的疫苗將以化學(xué)合成和重組DNA技術(shù)為主的肽類(lèi)和蛋白質(zhì)亞單位疫苗以及核酸疫苗為主，但由于其在體內(nèi)的快速降解和消除而使它們存在的藥劑學(xué)缺陷。目前普遍采用的接種方式為注射，這種方式存在制作費(fèi)用高、耐受性差和需專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員操作等問(wèn)題。另

2、外，由于單獨(dú)接種疫苗引起的免疫應(yīng)答微弱，為提高疫苗的免疫原性，需多次接種或應(yīng)用佐劑以誘導(dǎo)出更理想的免疫應(yīng)答?？山到獾木酆衔镂⑶蚴且环N具有佐劑效應(yīng)的疫苗控釋系統(tǒng)，它可以提供大量抗原并保護(hù)其免受生理?xiàng)l件下的快速降解，通過(guò)微球?qū)λ窨乖某掷m(xù)或脈沖釋放行為，有效模擬傳統(tǒng)疫苗多次免疫程序，在相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)持續(xù)提供抗原。因而可降解的聚合物微球作為一種有效的靶向遞送系統(tǒng)，減少接種次數(shù)和免疫原的使用總量，因而可以改進(jìn)病人的適應(yīng)性、降低用藥成本。

3、 許多傳染性疾病是通過(guò)病原微生物與消化道、呼吸道和生殖道的表面黏膜接觸而引起的，口服疫苗給藥系統(tǒng)(orally administered vaccine delivery system，OAVDS)使用方便且直接刺激易感染部位(胃腸道黏膜)產(chǎn)生抗體，在抵御病原體入侵，尤其對(duì)最初在黏膜部位的病原體感染發(fā)揮重要作用，同時(shí)對(duì)兒童免疫、地區(qū)疾病的防治亦表現(xiàn)出特別的優(yōu)勢(shì)，而且OAVDS在減少接種次數(shù)、降低接種脫漏率、提高疫苗貯運(yùn)管理效率及簡(jiǎn)化接

4、種方式等方面具有重要意義。以胃腸道黏膜為輸送部位的OAVDS，是目前疫苗遞送研究的熱點(diǎn)之一。但由于受胃腸道因素的影響，多數(shù)蛋白類(lèi)藥物易失活且吸收差，致使生物利用度低，其口服給藥系統(tǒng)研究仍面臨挑戰(zhàn)。為了解決胃腸道因素對(duì)疫苗活性影響，提高疫苗的免疫效果，增強(qiáng)疫苗的穩(wěn)定性、靶向性及延長(zhǎng)疫苗作用的效期，目前新型的疫苗載體—微球載體可有效避免胃腸道環(huán)境對(duì)疫苗的降解作用，在實(shí)現(xiàn)整體式攝取后，于免疫效應(yīng)部位引發(fā)高效的應(yīng)答反應(yīng)，最終實(shí)現(xiàn)疫苗的單劑量接種

5、。目前，已有流感、乙肝和百日咳桿菌、支原體肺炎、破傷風(fēng)等多種疫苗采用微粒形式作為口服接種的載體，源于腸毒性大腸桿菌移生因子抗原的口服微球疫苗已進(jìn)入臨床前試驗(yàn)。 本研究首次采用水溶性殼聚糖、海藻糖作為保護(hù)劑配方，通過(guò)噴霧干燥技術(shù)制備了噬菌體展示的1型糖尿病殼聚糖微球疫苗。掃描電鏡下觀察其形態(tài)及粒徑大小，滴度法檢測(cè)其活性及熱穩(wěn)定性。結(jié)果通過(guò)噴霧干燥法制備了粒徑大小為5—50μm左右的殼聚糖微球疫苗，收率在35％—53％左右，滴度檢測(cè)

6、顯示噴霧干燥后實(shí)驗(yàn)組樣品的滴度與對(duì)照組相比均降低，并且實(shí)驗(yàn)組的滴度隨著入口溫度的升高先升高而后降低，熱穩(wěn)定性分析顯示噴霧干燥樣品37℃保存一周和25℃保存6個(gè)月后，滴度下降的幅度明顯小于對(duì)照組，6個(gè)月后實(shí)驗(yàn)中滴度最小降幅為21.86％、最大降幅為36.34％，而對(duì)照組下降了57.79％，與對(duì)照組相比制備的殼聚糖微球疫苗具有更好的熱穩(wěn)定性。此外，通過(guò)對(duì)結(jié)果的正交分析，我們確定了最佳的噴霧干燥工藝A4B1C3D2，即殼聚糖的濃度為1％、殼聚