內(nèi)生固氮菌在海濱雀稗中的多樣性和生理功能研究.pdf

1、本研究以Platinum，Sea Isle2000，Salam，Supreme4種海濱雀稗的根、莖、葉為材料，用無(wú)氮源的選擇性培養(yǎng)基、平板劃線法和顯微鏡檢測(cè)分離純化其內(nèi)生菌，結(jié)合乙炔還原法測(cè)定固氮酶活性，共分離篩選到55株具有固氮活性的內(nèi)生菌，通過(guò)SDS-PAGE及 IS-PCR將這55株內(nèi)生固氮菌進(jìn)行聚類(lèi)分析，并選取部分代表菌株進(jìn)行16S rDNA序列測(cè)定；同時(shí)，選取固氮活性較高的菌株進(jìn)行溶磷性測(cè)定和表觀形態(tài)觀測(cè)，并挑選2種代表菌株回

2、接到黑麥草、柱花草和水稻中進(jìn)行促生效果驗(yàn)證，得出以下結(jié)果：
　?。?）55株內(nèi)生固氮菌經(jīng)特異引物PCR擴(kuò)增，均得到約360 bp的nifH片段。測(cè)得固氮酶活性范圍在34.09~2948.08 nmol C2H2?mL-1?h-1之間，最大為T(mén)t22948.08 nmol C2H2?mL-1?h-1，最小為T(mén)t134.09nmol C2H2?mL-1?h-1，不同菌株的固氮酶活性差別較大。
　?。?）兩種方法將55株菌株分別聚

3、為10類(lèi)和11類(lèi)，在SDS-PAGE中，將IS-PCR中的Group1和Group2聚為一個(gè)類(lèi)群，而將Group3和Group4重新聚為兩個(gè)類(lèi)群，其余均一樣，可見(jiàn)兩種聚類(lèi)方法結(jié)果一致性較高。
　　（3）選取11株代表菌株進(jìn)行16S rDNA序列分析，結(jié)果表明，這些菌株分屬假單胞菌屬（Stenotrophomonas）、根瘤菌屬（Rhizobium）、埃希氏菌屬（Escherichia）、腸桿菌屬（Enterobacter）、寡養(yǎng)單

4、胞菌屬（Stenotrophomonas）、檸檬酸桿菌屬（Citrobacter）、短小桿菌屬（Curtobacterium）和勒克氏菌屬（Leclercia）8個(gè)屬，具有較大的遺傳多樣性，與全細(xì)胞蛋白電泳和指紋圖譜電泳聚類(lèi)結(jié)果呈現(xiàn)的多樣性一致。
　?。?）使用VM-Ethanol固體培養(yǎng)基對(duì)11株代表菌株進(jìn)行外觀形態(tài)的觀察，用改良的Pikovaskaia’s固體培養(yǎng)基對(duì)17株代表菌株進(jìn)行溶磷性的定量定性測(cè)定，測(cè)得16株菌株有溶磷

5、性，可溶性磷含量在9.06~29.04 ug?mL-1之間，其中Bt6溶磷量最低，為9.06 ug?mL-1，Zr2的溶磷量最高，為29.04 ug?mL-1。不同菌株的菌落形態(tài)明顯不同，革蘭氏染色多為陰性，顯微鏡觀察菌株均為桿狀形態(tài)。
　?。?）選取菌株Bt10和Tr4菌株對(duì)黑麥草、柱花草和水稻進(jìn)行回接，發(fā)現(xiàn)接種菌液的植株與對(duì)照相比在株高、根長(zhǎng)、地上生物量和地下生物量方面均存在顯著差異（P<0.05）。接種菌液Tr4植株的促生效