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文檔簡介
1、目的:激素性股骨頭壞死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)是骨科的常見病和疑難病。目前激素性O(shè)NFH的臨床治療進展緩慢,往往出現(xiàn)壞死才進行治療,嚴重影響了患者的工作和生活質(zhì)量,由于其發(fā)病機制尚不清楚,現(xiàn)仍沒有有效的預防措施,最終大多需行人工全髖關(guān)節(jié)置換。因此,干預、阻斷使用激素導致的ONFH進展,對其發(fā)病機制和防治技術(shù)進行研究,具有重要的意義。本實驗中,建立激素性股骨頭壞死動物模型,應(yīng)用六味地
2、黃丸干預,探討六味地黃丸預防ONFH的可行性及分子機制,為臨床激素必需性應(yīng)用所致ONFH的預防提供實驗依據(jù)。
方法:取成年健康昆明小鼠36只,體重40~50 g,平均46g,隨機分為3組(n=12)。三組動物體重和雌雄數(shù)經(jīng)t檢驗差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)??瞻讓φ战M(A組),馬血清+激素組(B組),馬血清+激素+六味地黃丸組(C組);B、C組小鼠按10 mL/kg腹腔注射馬血清,間隔2周后按5 mL/kg再次腹腔注射
3、馬血清,第二次注射馬血清同時肌肉注射醋酸潑尼松龍45 mL/(kg·d),共5 d,制備激素性O(shè)NFH小鼠模型,于應(yīng)用激素同時B組灌服生理鹽水10 mL/(kg·d),C組灌服六味地黃丸2g/(kg·d)至處死;A組小鼠不制備模型,同時間點肌肉注射及灌服等量生理鹽水。處理后觀察小鼠一般情況,于第1次激素注射后2、4、8周處死小鼠,大體觀察股骨頭,取雙側(cè)股骨頭及肝臟行組織學及免疫組織化學染色觀察,TUNEL法檢測骨細胞凋亡情況。統(tǒng)計學分析
4、采用SPSS13.0軟件包進行分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示,組間比較采用方差分析,兩兩比較采用SNK檢驗,P值<0.05為有統(tǒng)計學意義。
結(jié)果:一般情況及大體觀察:第一次腹腔注射馬血清后所有小鼠均無明顯變化;第二次腹腔注射馬血清后約6小時,B、C組小鼠出現(xiàn)食量減少、萎靡、反應(yīng)遲鈍、活動少等現(xiàn)象,C組小鼠約1周后逐步好轉(zhuǎn),B組小鼠約2周后逐步好轉(zhuǎn),A組小鼠無明顯變化。B組小鼠于第二次腹腔注射馬血清后7d、11d各死亡一只,C
5、組小鼠于第二次腹腔注射馬血清后10min死亡一只,余小鼠均存活至實驗完成。3組動物各時間點股骨頭外觀形態(tài)均正常,關(guān)節(jié)軟骨面均光滑、平整,色澤無異常。
HE染色觀察:A組各時間點肝臟均正常;股骨頭骨小梁粗大、完整,排列規(guī)則,骨細胞清晰可見,偶見空骨陷窩,髓間脂肪細胞相對較少,形態(tài)正常,造血細胞豐富。B組第1次激素注射后2周時肝細胞腫脹,細胞內(nèi)可見小脂肪空泡,肝索結(jié)構(gòu)不清,肝竇變窄;第1次激素注射后2周時見骨小梁較正常變細,部
6、分斷裂,骨細胞空骨陷窩增多,部分骨細胞邊聚、固縮,髓間脂肪細胞直徑增大,數(shù)目增多;4、8周時骨小梁變細、稀疏,斷裂處增加,可見骨碎片出現(xiàn),空骨陷窩率增高。C組肝臟及股骨頭各時間點較A組變化不顯著。B組空骨陷窩率明顯高于A、C組(P<0.01),A、C組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
免疫組織化學染色觀察:A組各時間點骨保護素(osteoprotegerin,OPG)棕黃色顆粒多見、骨保護素配體(osteoproteg
7、erin ligand,OPGL)棕黃色顆粒較少,陽性染色率無明顯改變;B組第1次激素注射后2周,OPG陽性表達棕黃色顆粒偶見,OPGL陽性表達棕黃色顆粒較多,第4、8周時,陽性率降低和升高有增加趨勢;C組各時間點OPG棕黃色顆粒多見、OPGL棕黃色顆粒較少,隨時間延長,陽性染色率稍升高和降低,C組各時間點OPG、OPGL蛋白表達較A組稍降低和升高。各時間點B組與A、C組比較,股骨頭OPG局部表達明顯下降,OPGL局部表達明顯上升,差異
8、均有統(tǒng)計學意義(P<O.01),A、C組間OPG陽性表達水平第2周時差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),第4、8周時差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);A、C組間OPGL陽性表達水平第2、4周比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),第8周差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
細胞凋亡分析顯示:B組各時間點均可見細胞核中出現(xiàn)較多棕黃色顆粒的陽性細胞,其凋亡指數(shù)(apoptosis index,AI)隨時間延長增大;A、C組各時間點陽
9、性細胞偶見,細胞AI無明顯改變。B組較A、C組骨細胞凋亡指數(shù)顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P<O.01)。
結(jié)論:
1.六味地黃丸對激素應(yīng)用導致的肝臟脂質(zhì)代謝紊亂具有明顯的預防作用。
2.六味地黃丸具有改善骨代謝、保護骨細胞的作用,可通過抑制激素對成骨細胞活性的影響,阻止骨吸收,促進骨形成和骨修復。
3.六味地黃丸可以拮抗激素對OPG和OPGL蛋白表達的影響,從而促進成骨細胞增殖,降
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