西地那非預(yù)防激素性股骨頭壞死的保護機制研究.pdf

1、目的：激素性股骨頭缺血性壞死(steroid-induced osteonecrosis of the femoral head，SONFH)是由于多種因素的相互作用破壞了股骨頭內(nèi)的血液供應(yīng)，造成骨髓細(xì)胞和骨細(xì)胞死亡的病理過程，是一種常見的骨科疾病。目前在臨床上治療激素性股骨頭壞死進展相對緩慢，經(jīng)常出現(xiàn)壞死后才治療，這就嚴(yán)重影響了患者的工作和生活質(zhì)量，因為它的發(fā)病機制目前尚不完全清楚，目前仍沒有有效的預(yù)防措施，最終常需要全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)。

2、因此，干預(yù)激素性股骨頭壞死的進展，研究其發(fā)病機制及防治技術(shù)，具有十分重要的意義。而西地那非作為一種活血藥物，具有擴張血管平滑肌，且能夠抑制血小板的活化、聚集和分泌，達到擴張血管，進而增加血管內(nèi)血流的作用，然而有關(guān)西地那非在股骨頭缺血壞死具體作用機制尚不清楚，本實驗中，我們建立激素性股骨頭壞死的動物模型，應(yīng)用西地那非進行干預(yù)，探討西地那非預(yù)防SONFH可行性和分子機制，為臨床激素必需性使用所致股骨頭壞死提供實驗依據(jù)。
　　方法：取8

3、周健康C57BL/6小鼠30只，隨機分為3組(n=10):空白對照組（A組）、內(nèi)毒素/激素組（B組）、內(nèi)毒素/激素/西地那非組（C組）。三組動物的體重和雌雄數(shù)經(jīng)t檢驗無顯著差異(P＞0.05)，B和C組小鼠按50μ g/kg腹腔注射內(nèi)毒素，連續(xù)兩天，每天一次。第三天開始按20mg/kg腹腔注射甲潑尼龍琥珀酸鈉，連續(xù)4天，每天一次;同時C組注射西地那非，按2mg/(kg·d)至處死（一共注射28天）。每天觀察小鼠的情況，于4周后處死全部小

4、鼠，觀察股骨頭的大體形態(tài)，取雙側(cè)股骨頭及肝臟進行HE染色和免疫組織化學(xué)染色觀察;取股骨頭、肝臟及腎臟進行WB，分析蛋白激酶G(PKG)含量的變化。用SPSS17.0軟件包對實驗結(jié)果進行分析，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組組之間比較采用方差分析，兩兩比較應(yīng)用SNK檢驗，P＜0.01為有顯著差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義;P＜0.05為有差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義; P＞0.05為無顯著差異，無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：一般情況與大體觀察:3組股骨頭外觀

5、、關(guān)節(jié)軟骨面及形態(tài)均正常。HE染色顯示:A組肝臟及股骨頭均為正常。B組可見肝細(xì)胞明顯腫脹，細(xì)胞內(nèi)可見小脂肪空泡分布，肝索結(jié)構(gòu)不清晰，肝竇變窄;股骨頭區(qū)骨小梁明顯變細(xì)、稀少，部分甚至可見到斷裂。C組可見肝臟及股骨頭形態(tài)與A組相差不大，介于A組與B組之間，但明顯較B組好轉(zhuǎn)。B組股骨頭空骨陷窩明顯高于A，C組(P＜0.01)有顯著差異，A與C組相比(P＞0.05)無顯著差異。免疫組織化學(xué)染色(IHC)顯示:A組的OPG（骨保護素）棕黃色顆粒分

6、布較多見，骨保護素配體(OPGL)棕黃色顆粒較少見，陽性染色率低;B組注射激素4周后，OPG陽性棕黃色顆粒少見，OPGL陽性棕黃色顆粒較多見， C組OPG棕黃色顆粒較多見、OPGL棕黃色顆粒較少見， C組的OPG、OPGL蛋白表達較A組稍微降低及升高。B組與A、C組相比較，股骨頭OPG局部的表達明顯下降，OPGL局部的表達明顯上升，均具有顯著差異(P＜0.01)，A、C組間OPG、 OPGL的陽性水平差異不顯著(P＞0.05)。WB顯示

7、:B組與A、C組相比較，股骨頭和肝臟及腎臟PKG表達顯著降低(P＜0.01)，A、C組間PKG表達無顯著差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.西地那非對應(yīng)用激素造成的肝臟脂質(zhì)代謝的紊亂具有明顯的預(yù)防作用。
　　2.西地那非通過對骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞活性的影響，發(fā)揮改善骨代謝，保護骨細(xì)胞效應(yīng)，從而防止骨吸收、促進骨形成和骨修復(fù)。
　　3.西地那非可拮抗激素對PKG蛋白表達的影響，從而通過擴張血管平滑肌，舒張血管，