腎炎寧方對IgA腎病模型大鼠腎臟組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)表達的影響.pdf

1、目的:IgA腎病(IgAN)是當今世界上最常見的原發(fā)性腎小球疾病。本研究通過動物實驗,觀察腎炎寧對IgA腎病大鼠的24h尿蛋白定量、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及腎臟組織中TNF-α、NF-κ B表達情況的影響,探討該方對IgA腎病腎臟組織損害的治療作用。
　　 方法:將30只健康雄性SD大鼠,體重130g±10g,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后用代謝籠收集檢測尿蛋白和潛血均為陰性,按體重隨機分為3組,每組10只,分別為正常組、模型組

2、和腎炎寧組。除正常組外其余各組均給予隔日口服0.1％牛血清白蛋白(BSA)酸化水6周,于第7周開始每周連續(xù)3天尾靜脈注射BSA緩沖液,連續(xù)6周,于第8周追加注射葡萄球菌腸毒素B(SEB),每周1次,連續(xù)3周以復(fù)制IgA腎病模型,正常組大鼠口服及注射等量生理鹽水。第9周開始腎炎寧組給予腎炎寧煎劑灌胃,正常組、模型組均灌服等量生理鹽水,共給藥8周。分別于造模前、造模后第5周末、第7周末、第11周末、第16周末代謝籠收集24h尿液,行24h尿

3、蛋白定量測定。16周末處死大鼠,股動脈取血,檢測血清肌酐、尿素氮含量,留取腎臟組織,光鏡下觀察大鼠腎小球的變化,免疫熒光觀察IgA沉積情況,免疫組化及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)對腎組織中TNF-α和NF-κ B進行半定量分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.24h尿蛋白定量
　　 造模前各組大鼠24h尿蛋白定量均無差異;造模第5周末,模型組和腎炎寧組大鼠24h尿蛋白定量均明顯升高,與正常組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05

4、)。造模第7周末,模型組和腎炎寧組大鼠24h尿蛋白定量較第5周末有所升高,但兩者之間仍無差異;造模第11周末,腎炎寧組大鼠的24h尿蛋白定量較模型組明顯減少,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。造模第16周末,腎炎寧組大鼠的24h尿蛋白定量較模型組明顯減少,差亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.血Scr和BUN
　　 正常組、模型組與腎炎寧組相比,大鼠血清Scr及BUN差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　

5、　 3.腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察
　　 光鏡下,正常組腎小球結(jié)構(gòu)完整,腎小球系膜、基質(zhì)未見明顯異常改變;模型組可見腎小球系膜區(qū)明顯增寬、系膜細胞增生、系膜基質(zhì)增多;腎炎寧組也均有不同程度的病理改變,但與模型組相比病變減輕。
　　 免疫熒光觀察:正常組腎小球系膜區(qū)無免疫復(fù)合物沉積,模型組可見免疫復(fù)合物沿腎小球系膜區(qū)呈顆粒狀分布,腎炎寧組也可見不同程度的免疫復(fù)合物沉積,但較模型組減輕。
　　 4.對大鼠腎組織TNF-α蛋

6、白及其基因表達的影響
　　 免疫組化染色顯示:TNF-α主要表達于腎小球系膜細胞胞漿內(nèi),半定量分析結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組和治療組的表達要明顯加強(P＜0.05),與模型組比較,腎炎寧組的表達要明顯降低(P＜0.05)。
　　 RT-PCR結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組和治療組表達明顯升高(P＜0.05),而與模型組比較,腎炎寧組大鼠腎組織TNF-α表達則明顯降低(P＜0.05)。
　　 5.對大鼠腎組織N

7、F-κ B蛋白及其基因表達的影響
　　 免疫組化染色顯示:NF-κ B主要表達于腎小球、腎小管細胞胞核內(nèi),半定量分析結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組和治療組陽性增強的核占的百分比顯著增加(P＜0.05),與模型組比較,腎炎寧組的表達明顯降低(P＜0.05)。
　　 RT-PCR結(jié)果顯示:與正常組相比,模型組和治療組表達顯著增加(P＜0.05),與模型組比較,腎炎寧組的表達明顯降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論