羅格列酮對(duì)胰島素抵抗人肝細(xì)胞ANGPTL3及LXRα基因表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：建立胰島素抵抗L02細(xì)胞模型，觀察羅格列酮對(duì)不同葡萄糖濃度下的正常和胰島素抵抗人肝細(xì)胞（L02）內(nèi)ANGPTL3和LXRα基因表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討血管生成素樣蛋白3（Angiopoietin-like protein3，ANGPTL3）和肝X受體α（Liver X receptorα，LXRα）與糖尿病、高脂血癥的關(guān)系。采用免疫印跡技術(shù)（western blotting）方法檢測(cè)單純高血糖、高血糖合并高膽固醇、高血糖合并高甘油三

2、酯以及血糖血脂正常者血清中ANGPTL3蛋白質(zhì)含量的差異，探討血糖血脂對(duì)人血清中ANGPTL3含量的影響，為建立通過(guò)測(cè)定ANGPTL3分析其與相關(guān)疾病關(guān)系奠定基礎(chǔ)。 方法：①以L02為研究對(duì)象，隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組（N組）、胰島素抵抗組（IR組）、羅格列酮作用的胰島素抵抗組（IR-R組）、羅格列酮作用的正常組（N-R組）。每組觀察4個(gè)葡萄糖濃度：5.6、7.0、11.1、33.0mmol/L的影響。采用GOD-POD法檢測(cè)細(xì)

3、胞培養(yǎng)液中葡萄糖濃度，并確定胰島素抵抗細(xì)胞模型是否建立成功。用逆轉(zhuǎn)錄--聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中LXRα和ANGPTL3的mRNA水平。②收集臨床血清標(biāo)本（血糖血脂正常組7例，單純高血糖組6例，高血糖合并高膽固醇組5例，高血糖合并高甘油三酯組6例），采用免疫印跡技術(shù)（western blotting）的方法檢測(cè)各標(biāo)本中ANG

4、PTL3蛋白質(zhì)含量差異。 結(jié)果：①IR-R組與IR組比較，細(xì)胞培養(yǎng)液殘存葡萄糖量明顯減少（P<0.05）。②在N組、N-R組、IR組、IR-R組組內(nèi)，外周環(huán)境葡萄糖濃度的升高可促進(jìn)ANGPTL3的mRNA表達(dá)；在相同外周葡萄糖濃度的環(huán)境下，IR1與N1組的Angpt13表達(dá)水平無(wú)明顯差異（P>0.05），而IR2～I(xiàn)R4的Angpt13表達(dá)較N2～N4組明顯增加（P<0.05）；同葡萄糖濃度的IR-R組各濃度組的Angpt13表

5、達(dá)較IR組各濃度組明顯增加（P<0.05）；同葡萄糖濃度下N-R組Angpt13 mRNA表達(dá)水平較IR-R組高（P<0.05）。在N組、N-R組、IR組、IR-R組各組的5.6mmol/L濃度組和7.0mmol/L濃度組比較LXRα表達(dá)量無(wú)明顯差異（P>0.05），2、3、4各濃度組之間的LXRa表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在葡萄糖濃度≥11.1mmol/L時(shí)，可促進(jìn)了LXRα的表達(dá)，且成劑量依賴性（P<0.05）。在相同

6、外周葡萄糖濃度的環(huán)境下，IR組LXRα表達(dá)較N組明顯降低（P<0.05），IR-R組LXRα表達(dá)較IR組明顯增加（P<0.05），N-R組LXRα表達(dá)量均較IR-R組高（P<0.05）。⑨Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示，單純高糖組患者的血清中ANGPTL3蛋白質(zhì)含量明顯高于正常組（P<0.05），高血脂合并高糖組明顯高于單純高糖組和正常組（P<0.05），而高膽固醇合并高糖組的血清ANGPTL3蛋白質(zhì)含量較高甘油三酯合并高